《病原生物与免疫学》课件09免疫学应用.pptxVIP

第九章 免疫学应用;学习目标： 1. 掌握免疫学检测的原理，抗原抗体反应的特点及影响因素。 2. 熟悉凝集反应、沉淀反应的种类，免疫标记技术的种类和原理。 3. 了解T细胞功能的体内检测方法及临床意义、人工主动免疫与人工被动免疫的区别、用于免疫预防的常用生物制品、计划免疫的程序、临床常用的免疫学治疗制剂。;病原微生物感染人体后，人体内可发生特异性体液免疫应答或细胞免疫应答。用免疫学检测技术检测机体内的免疫应答产物即免疫学诊断，主要用于辅助诊断某些传染病或进行流行病学调查。 免疫学检测技术是借助免疫学、细胞生物学、分子生物学等相关学科的理论或技术，对抗原、抗体、细胞因子及免疫细胞等进行定性、定量检测或功能检测，以协助对传染病或相关疾病的诊断、判断机体的免疫功能状态及疾病的预后和转归，或进行流行病学调查的技术。目前，免疫学检测技术已在医学及生物学研究领域得到了广泛的应用。其中，在临床医学领域，免疫学检测技术已从最初对传染病的诊断扩展到对肿瘤、超敏反应性疾病、自身免疫性疾病，以及微量蛋白、激素和药物的检测。本节仅介绍常用免疫学检测技术的基本原理及其临床应用。; 一、 抗原或抗体的检测 抗原与抗体的结合在机体内可表现为中和细菌毒素、溶解细胞、杀菌、促进吞噬或引起免疫病理损伤等；在体外，由于抗原与抗体结合的物质基础是抗原表位和抗体可变区空间构型的互补性，因此在一定条件下，抗原与相应的抗体在体外结合后可出现肉眼可见的凝集、沉淀、补体结合等多种反应。 （一） 抗原-抗体反应的特点 1. 特异性抗原与抗体的结合具有高度的特异性。 2. 可见性抗原与抗体的结合能否引起肉眼可见的反应取决于抗原与抗体的比例是否合适。 3. 可逆性抗原与抗体的结合是分子表面的结合，为非共价键结合。; （二） 影响抗原-抗体反应的因素 在抗原-抗体反应过程中，有许多因素可影响其结果。 1. 温度适宜的温度可增加抗原与抗体分子接触的机会，缩短反应时间，通常为37 ℃。 2. 酸碱度pH过高或过低均可影响抗原、抗体的理化性质，因此，抗原-抗体反应需要合适的pH溶液，最适宜的溶液pH为6～8。 3. 电解质抗原和抗体都有相应的极性基团，能相互吸附并由亲水性变为疏水性。;（三） 常见的抗原-抗体反应类型 常见的抗原-抗体反应包括凝集反应、沉淀反应和免疫标记技术。 1. 凝集反应细菌或细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合时，在适宜电解质存在的条件下可形成肉眼可见的凝集物，即凝集反应（图9-1）。 ; （1） 直接凝集反应：指细菌或红细胞与相应抗体直接结合而引起的凝集现象。引出直接凝集反应的主要方法有玻片法和试管法。玻片法是使已知抗体与未知抗原在玻片上发生反应，为定性试验，方法简便，可用于菌种鉴定、血型鉴定等。 （2） 间接凝集反应：指使可溶性抗原吸附于与免疫无关的载体颗粒上，形成致敏颗粒，再与相应的抗体进行反应，引起肉眼可见的凝集现象。 （3） 间接凝集抑制试验（indirect agglutination inhibition test）：指将可溶性抗原与相应的抗体预先混合并使其充分作用后，再加入致敏颗粒。;2. 沉淀反应可溶性抗原（如血清蛋白质、组织浸出液、细菌裂解液等）与相应的抗体结合后，在一定条件下可形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应（precipitation）。 （1） 单向琼脂扩散试验：将一定量的已知抗体均匀混合于溶化的琼脂中，制成琼脂板，然后按一定的要求打孔，并在孔中加入待测抗原。;（2） 双向琼脂扩散试验：将抗原和抗体分别加入琼脂板的不同孔中，二者可同时在琼脂中向周围扩散，在相遇处形成白色沉淀线（图9-3）。相应的抗原与抗体结合只形成一条沉淀线。 ;（3） 对流免疫电泳：在双向扩散的基础上进行的电泳。对流免疫电泳的方法是将抗原孔置于阴极端，抗体孔置于阳极端。由于抗原的分子量小于抗体，在pH为8.6的缓冲液中所带的负电荷较抗体多，因此在电场中抗原克服了电渗作用而从负极泳向正极；而抗体的分子量大，带的负电荷少，故从正极泳向负极，这样抗原与抗体形成对流，当抗原与抗体在两孔间相遇时就会形成沉淀线（图9-4）。;（4） 免疫比浊法：属于液相沉淀试验，其基本原理是抗原与抗体在特定的电解质溶液中反应时形成可溶性免疫复合物，该复合物在稀释系统中的聚乙二醇等的作用下自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。 1） 免疫透射比浊法：抗原与抗体结合后形成免疫复合物，在一定时间内，免疫复合物可聚合，使溶液出现浊度，光线通过溶液时可被免疫复合物吸收，免疫复合物的量越多，光线被吸收得越多。 2） 速率散射比浊法：抗原与抗体结合的动力学测定法。; 3. 免疫标记技术免疫标记技术（immunolabelling technique）是指用荧光素、酶、放射性核素、发光剂或电子致密物质，如铁蛋白、胶