薄层色谱板的制备和使用.pdfVIP

实验一 薄层色谱板的制备和使用 目的要求： 通过实验进一步理解薄层色谱技术理论，熟悉掌握薄层色谱板的制备和使用方 法。 一、薄层层析的基本原理 把吸附剂（固定相）均匀地铺在一块玻璃板上，将待分离的样品溶液点加在 一薄层板的一端，在密闭的容器中用适当的溶剂（流动相）展开，由于吸附剂对不 同物质的吸附力大小不同及溶剂对不同物质溶解分配系数不同，当溶剂流过时，各 物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附，解吸附，再吸附，再解吸附。不易 被吸附或易被溶剂溶解的物质相对移动得快一些。经过一段时间的展开，不同的物 质被彼此分开，最后形成相互分离的斑点。将展开完毕的薄层板从密闭容器中取出 后，应用特定的试药或方法将斑点显色，从而达到定性和定量的目的。 二、薄层板的制备 1．玻璃板 用一块玻璃板涂上很薄的吸附剂，如硅胶或氧化铝等，玻璃板要求薄厚一 致，大小相同，表面光滑平整，一般玻璃只要合乎这些要求就可。如果找不到平整 均一的，将旧光学照像底片截成同样大小也可以。用前先将玻璃用肥皂和水洗干 净，必要时浸泡在清洗液中，然后水洗烤干，用纱布擦光。 玻璃板大小有各种规格，一般有 20×20、20×10、20×5 厘米，也有更小的， 可根据需要自行设计。宽度要求至少能点开两三个样品，每两点之间相隔至少 1.5 厘米，玻板长度一般要满足展开 10厘米的距离。点样的起点应距底边至少 1.5厘 米的距离。 2．吸附剂 应用最广泛的为硅胶和氧化铝，市场上有专供薄层色谱用的吸附剂，规格分 不含粘合剂的硅胶 H，氧化铝H 和含有粘合剂熟石膏的硅胶 G，氧化铝G，如市售 硅胶 G 含 13％熟石膏，氧化铝分中性、酸性、碱性三种。吸附剂的粒度范围最好 在 180－200 目之间，太小了流速慢，太大则影响分离效果。如不合要求，应过 筛。 3．薄层板的涂布 最简单的涂布方法是用两条比玻璃板厚 0．25 毫米的玻璃条或有机玻璃条 （或在同样厚度的玻璃条下粘一层胶布），将玻璃板夹住，把调好的吸附剂浆液平 铺在薄层板上，然后用一有机玻璃条或直尺，迅速均匀地向前推进，就象推血片一 样，只要推进的速度均匀一致，即可得到薄厚均匀的薄层板，如在一块玻璃板末端 再接一块相同的玻璃板，把剩余的装液接过去，可使涂层边缘整齐，厚度一致，吸 附剂浆液的加水量和搅拌时间是涂布成败的关键，像12×8平方厘米的玻璃板需要 2~3 克硅胶 G，加 4~6 毫升水即可，只要技术熟练即能涂成厚薄一致，光滑平整的 一块薄层板。不同性质不同批号的吸附剂，加水量和搅拌时间有时可有差异，应根 据情况摸出规律。为了达到涂布的各板厚度均匀一致，最好采用涂布器进行薄层的 涂布。 为了增加薄层的牢固性及易于保存，可在涂布过程中加入某些粘合剂以增加 薄层的硬度。 一般采用添加剂羧甲基纤维素钠（CMC—Na），应用方法是取 CMC-Na 1 克溶 于 100 毫升水中，加热煮沸溶解，按比例与硅胶搅匀，铺板。涂成之后先把玻板放 在平面上，室内干固，再对光检查，看是不是均匀，有无气泡，平整光洁度如何， 合格的上烤箱 110℃加热 30 分钟进行活化，冷却后贮于干燥器内备用。 在进行实验时，应尽量可能采用同批号涂布活化的薄层板，以减少因活化不 一致引起的 Rf 值发生差异，目前国内市场已有成品供应，如黄岩化学分析材料厂 即有各种类型的薄层板出售。 三、薄层板的使用 1．点样 将样品溶于适当的溶剂中（应尽量避免有水），取微量注射器或玻璃毛细管 截齐后，吸取一定量的检样，轻轻接触到薄层上，使样品自动吸到薄层上，点的直 径不要超过 0.3 厘米，一次不能点完，待干后再点，稍有过分就会损伤板面，影响 展开后的斑点形状。每两个样点之间相距至少 1.5 厘米。点样的起点距薄板底边至 少 1.5 厘米，以免样点浸入展开溶剂中，同块薄板上各样点应保持在与底边平行的 一条直线上，为控制好点样距离，应用薄层点样尺架。 2．展开 根据薄层板大小，自行选用适当玻璃标本缸，长方形，如 17×10×6 厘米的 标本缸可容纳下 15×9 厘米的玻璃板。采用较大的玻璃缸和玻璃板时，在缸内沿周 围缸壁衬一层预先浸有溶剂的滤纸，以便缸内展开溶剂易达到饱和，防止边缘效应 （即两边缘的点走得快）和同一物质Rf 值不一致现象。 一般将薄层板斜置展开容器内，密闭。先不使溶剂浸湿薄层板，饱和