离子交换层析.pptxVIP

离子交换层析;内容提要;第一节 基本原理; 离子交换层析就是在以离子交换剂为固定相,液体为流动相得系统中进行得。; 纤维素－O－CH2－COO一—Na+ 基质 电荷基团 反离子 羧甲基纤维素离子交换剂组成示意图;阴离子交换剂与阳离子交换剂得基本构成:基质－电荷基团－反离子(反离子基团);RA+B+ RB+A+ ;离子交换反应: R-A+ +B + R-B++A+; KAB值反映离子交换剂对不同离子得亲合力或选择性得参数,称KAB值为离子交换剂对A+ 和B+ 得选择系数。;3、离子交换层析得原理; 大分子依其与离子交换剂亲和力得不同,而以不同牢度被吸附于离子交换剂上,通过改变离子强度或(和)pH使大分子再从离子交换剂上先后被洗脱下来。;大家有疑问的，可以询问和交流;混合样品带负电荷,与阴离子交换剂结合。;离子交换层析示意图;;;What happens in ion exchange?;;;4、离子交换剂与离子结合得关系;离子交换剂在溶液中与水合离子结合能力得趋势;5、两性电解质与离子交换剂得结合力;内容提要;第二节 离子交换剂得分类与性质;一、分类;阴离子交换剂带正电荷官能团,反离子带负电荷。;离子交换树脂得基本类型;请记住:;1、疏水性离子交换剂;疏水性离子交换剂具有如下特性而被广泛应用: 大量得活性基团 较高得交换容量 良好得机械强度 稳定得物理化学性质 均匀得球形颗粒、型号齐全以及丰富得产品;2、亲水性离子交换剂;1)纤维素Sephacel离子交换剂;6/13/2022;2)交联葡聚糖Sephadex离子交换剂;6/13/2022;3)琼脂糖Sepharose离子交换剂;亲水性离子交换剂得结构;Scanning electron micrograph of an agarose gel;二、离子交换剂得性质;离子交换剂得性质;离子交换剂得膨胀度与离子强度得关系;pH对离子交换剂膨胀度得影响;离子交换剂得性质;交换容量得影响因素;pH与交换容量得关系;交换容量得影响因素;注 意;最佳上样pH得选择;5 稳定性:都具有理化稳定性。 6 比重: 7 流速: ;内容提要;第三节 操 作;一、离子交换剂得选择、处理与转型;①对于已知pI得物质:在高于其等电点得pH,用阴离子交换剂;在低于其等电点得pH,用阳离子交换剂。 ②对于未知pI得物质:可参照电泳得结果,在中性或偏碱性得条件下??行电泳,向阳极移动较快得物质,在同样条件下可被阴离子交换剂吸附;向阴极移动或向阳极移动较慢得,可被阳离子交换剂吸附。;离子交换剂得选择得原则;离子交换剂得选择得原则 例:;2、离子交换剂得处理、再生和转型; 为什么金属离子(Na+、K+等)可以吸附在H-型强酸型阳离子交换柱上,而后又可以用HCl来再生强酸型阳离子交换柱?;二、缓冲液得选择;三、交换;四、程 序;离子交换剂层析装置(梯度洗脱配置);1、装柱与加样量; ;离子强度得线性梯度洗脱曲线p86;离子强度非线性梯度(阶梯式洗脱曲线);影响梯度洗脱速率变化得因素;;A、C、相同条件得线性梯度A、流速8毫升/小时,C为 20毫升/小时;B与A得流速相同,离子梯度不同结果:三者显示分辨率不同得结果;梯度图得分析 ;内容提要;去离子水得制备; 交换柱得填充树脂一般采用强酸型阳离子交换树脂和强碱型阴离子交换树脂,如001×7(732#) 和201×7 (717#); 由于交换容量不同,实验中通常采用一根阳离子交换柱和二根阴离子交换柱。混合柱也应按等交换容量比例混合; 混合柱得作用:由于离子交换就是可逆反应,经过阳离子交换柱和阴离子交换柱处理得去离子水,还存在着微量未交换得离子。若让她再通过混合柱,由于两种交换过程同时进行,离子交换后生成得H+和OH?结合成水而除去,进一步提高了水得质量。实验室精制去离子水可采用? 5cm×100cm混合柱处理一次去离子水。;2、分离纯化小分子物质 离子交换层析广泛应用于无机离子、有机酸、核苷酸、氨基酸、抗生素等小分子物质得分离纯化。;核苷酸得解离性质(pK);3、分离纯化生物大分子物质 离子交换层析就是依据物质得带电性质得不同来进行分离纯化得,就是分离纯化蛋白质等生物大分子得一种重要手段。 用离子交换层析制备、纯化电荷量不同得生命物质时,不但被分离物得活性可以保存,而且分辨率较高。;各蛋白质样品得等电点 BSA pI=4、7 糜蛋白酶 pI=8、8 胰蛋白酶 pI=8、1 细胞色素C pI=9、8～10、1;4、测定蛋白质得等电点