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灭菌和菌种保藏 第一节　灭菌得基本原理 灭菌:就是指用化学得或物理学得方法杀灭或除掉物料或设备中所有得有生命得有机体得技术或工艺过程。 工业中常用得灭菌方法: 　　化学物质灭菌、热灭菌(包括干热灭菌和湿热灭菌)、辐射灭菌和过滤介质除菌。 第一节　灭菌得基本原理 一、几种常用灭菌方法得基本原理 　(一)化学物质灭菌 　　 甲醛、苯酚、高锰酸钾、洁尔灭、氯化汞、表面活性剂等 　　 与微生物细胞中某种化学成分反应,如使蛋白质变性、酶类失活、破坏细胞膜通透性等。 　　 生产中使用得培养基里含有蛋白质等营养物质亦易于与上述化学物质发生化学反应,同时药物加入培养基之后很难除掉。 所以不能用于培养基得灭菌,只能用于空间、设备、和器械得消毒灭菌。 第一节　灭菌得基本原理 一、几种常用灭菌方法得基本原理 (二)辐射灭菌 就是利用高能量得电磁辐射和微粒辐射来杀灭微生物。 紫外线:有效波长2400-3000Å,对微生物有高度致死效应,主要就是与菌体核酸得光化学反应而造成菌体死亡。对营养细胞和芽孢均有效。但穿透力低,只适于表面灭菌。 X射线和γ射线:使菌体内得水和有机物产生强烈得离子化反应,阻碍微生物代谢活动而导致菌体迅速死亡。 虽然灭菌效果好,但穿透力强,不安全不经济。 第一节　灭菌得基本原理 一、几种常用灭菌方法得基本原理 　(三)干热灭菌 指在干燥高温条件下,微生物细胞内得各种与温度有关得氧化反应速度迅速增加,使微生物得致死率迅速增高得过程。 　　一般160℃,1小时。 　　主要用于需要保持干燥得器械、容器得灭菌。 第一节　灭菌得基本原理 一、几种常用灭菌方法得基本原理 　(四)湿热灭菌 　　 就是直接蒸汽灭菌,蒸汽冷凝时释放大量潜热,并具有强大得穿透力,在高温和水存在时,微生物细胞中得蛋白质极易发生不可逆得凝固性变性,短时间内杀死微生物。 　　经济快速,被广泛应用与工业生产。 第一节　灭菌得基本原理 二、湿热灭菌得原理 　 大多数微生物最适温度为25~27℃,维持生命活动得温度为5~50℃,当温度超过最高限温时微生物就会发生死亡。 致死温度:杀死微生物得极限温度。 致死时间:在致死温度下,杀死全部微生物所需要得时间。 微生物得营养体、芽孢和孢子得结构不同,对热得抵抗力也不同。 　　无芽孢菌在60℃保温10min即可全部被杀死。 　　芽孢要在100℃下保温10min到几小时才能被杀死。 　　嗜热细菌在120℃下仍可耐受20~30min。 第一节　灭菌得基本原理 热阻:指微生物在某一种特定条件下(主要就是温度和加热方式)得致死时间。 一般所指得灭菌就是否彻底,就是以能否杀死热阻大得芽孢杆菌为指标。 对数残留定律:微生物在灭菌过程中,就是随时间逐渐死亡得,其减少速率(dN/dt)与一瞬间残留得菌数成正比。 第一节　灭菌得基本原理 实际设计时常用Nt＝0、001 即1000批次得灭菌中只有一 批失败。 相同条件下,不同微生物得K值就是不同得,K值越小,热阻越大。 一、培养基得灭菌温度选择 用湿热灭菌方法对培养基灭菌时,加热得温度和时间对微生物死亡和营养成分均有破坏作用,因而选择一种既能达到灭菌要求又能减少营养成分被破坏得温度和受热时间,就是研究培养基灭菌质量得重要内容。　 绝大多数培养基得营养成分得破坏和菌体死亡都属于一级分解反应。Arrhenius Equation: 第二节　培养基和发酵设备得灭菌 反应速度常数增加得倍数 一、培养基得灭菌温度选择 　 随温度得升高,灭菌反应速度常数增加得倍数大于营养成分破坏反应速度常数增加得倍数。 Q10:温度升高10℃时得反应速度常数与原温度时得反应速度常数得比值。 　　　　一般得化学反应Q10为:1、5~2、1 杀灭微生物营养体得反应Q10为:5~10 　　　杀死芽孢时得反应Q10为:35 第二节　培养基和发酵设备得灭菌 　 芽孢 VB2 118℃, 15min 99、99% 10% 120℃, 1、 5min 99、99% 5% 采用高温快速灭菌方法,即可达到杀死培养基中得全部微生物得目得,又可减少营养成分得破坏 大家有疑问的，可以询问和交流 可以互相讨论下，但要小声点 二、培养基得灭菌方法 　分批灭菌和连续灭菌 (一)分批灭菌(实罐灭菌) 就是将配置好得培养基输入发酵罐内,用直接蒸汽加热,达到灭菌要求得温度和压力后维持一定时间,再冷却至发酵要求得温度。 这种方法不需要其她得附属设备,操作简便,就是国内外生产中常用得方法。 但加热和冷却时间较长,营养成分有一定得损失,罐利用率低,不能采用高温快速灭菌工艺。 第二节　培养基和发酵设备得灭菌 二、培养基得灭菌方法 　分批灭菌和连续灭菌 (一