基因的表达与调控.pptVIP

前导肽： 前导序列包括起始密码子AUG和终止密码子UGA，如果翻译起始于 AUG，应该产生一个14AA的多肽，这个假设的多肽称为前导肽。 mRNA前导区的序列分析 □具有4个分别以1、2、3和4表示的片段，能以两种不同的方式进行碱基配对。 1）1-2，3-4配对： 其中3-4配区正好位于终止密码的识别区，为终止构型 2）2-3配对：抗终止子结构 第三十页，共五十六页。 第三十一页，共五十六页。 4. 转录的弱化作用 □该理论认为，mRNA转录的终止是通过前导肽基因的翻译来调节的。因为在前导肽基因中有两个相邻的trp密码子（第10和11位），所以这个前导肽的翻译必定对tRNATrp的浓度敏感。 1）当培养基中[trp]低时，tRNATrp就少，翻译通过两个trp密码子的速度就慢，当4区被转录完成时，核糖体才进行到1区（或停留在两个trp密码子处），此时前导区结构为2-3配对，不形成3-4配对的终止结构，转录继续进行，直至将结构基因全部转录。 2）当培养基中[trp]高时， tRNATrp就多，核糖体顺利通过两个trp密码子，在4区被转录之前，核糖体就到达2区，形成形成3-4配对的终止结构，转录终止。 弱化作用对RNA Pol 的影响依赖于前导肽 翻译中核糖体所处的 位置 第三十二页，共五十六页。 □trp操纵子的阻遏作用与弱化作用的协调控制 1）细菌通过弱化作用弥补阻遏作用的不足，因为阻遏作用只能 使转录不起始，对于已经起始的转录，只能通过弱化作用使 之中途停顿下来，阻遏作用的信号是细胞内trp的多少。 2）弱化作用的信号是细胞内负载有trp的tRNATrp的多少，它通过 前导肽的翻译来控制转录地进行。 第三十三页，共五十六页。 7.4 其他操纵子 7.4.1 半乳糖操纵子（galactose operon） □大肠杆菌半乳糖操纵子在大肠杆菌遗传图上位于17min处，包括3个结构基因： 异构酶：galE 半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶：galT 半乳糖激酶：galK □调节基因：galR，距离结构基因及操纵区O等很远。位于遗传图上55min处。 galR产物对galO的作用与lacI-lacO的作用相同。 在galR-和galO-突变体中，E、T、K基因得到永久性表达。 □gal操纵子的诱导物主要是半乳糖。 第三十四页，共五十六页。 第三十五页，共五十六页。 □ gal操纵子的特点： 1）有两个启动子，其mRNA可从不同的起始点开始转录； 2）有两个O区，一个在P区上游-73— - 67，另一个在E基因内部。 □1. cAMP-CRP对gal启动子的作用 半乳糖的利用率比葡萄糖低，但在有葡萄糖存在时， gal操纵子 仍可被诱导！ 现已分离的突变株： 1）能在不含葡萄糖的培养基中高水平表达结构基因； 2）结构基因的表达完全依赖于葡萄糖。 第三十六页，共五十六页。 □ gal 操纵子有两个启动子，可以从两个启动子分别起始转录，每个启动子拥有各自的 RNA Pol结合位点S1和S2。cAMP-CRP对从S1和S2起始的转录有不同的作用。 1）从S1起始的转录只有在培养基中无葡萄糖时才能顺利进行，RNA Pol与S1的结合 需要半乳糖、CRP和较高浓度的cAMP。当cya-或crp- ，gal操纵子不能从S1起始 转录，此时若在体外系统中加入cAMP-CRP即可诱发从S1起始的转录。 当有cAMP-CRP时，转录从S1开始；当无cAMP-CRP时，转录从S2开始. 2）从S2起始的转录完全依赖于葡萄糖，高水平的cAMP-CRP能抑制由S2起始的转录。 □ 从S1转录：无G，有cAMP-CRP；从S2转录：有G，无cAMP-CRP。 □大肠杆菌的cya-（腺苷环化酶突变）或crp- （cAMP受体蛋白突变）突变型 不能利用乳糖，但可以利用半乳糖作为唯一碳源（S2）。 第三十七页，共五十六页。 □有一个gal启动子突变株，不能利用培养基中的半乳糖（无葡萄糖）， 若将此突变株再行突变为cya-或crp- ，细胞就恢复了利用半乳糖的能力。 Why？ 第一次突变失去了从S1起始转录的能力，却不影响从S2起始转录， 但由于细胞中cAMP-CRP的存在抑制了从S2开始的转录，使gal操纵子 既不能从S1起始又无法从S2起始转录。 再行突变后，即cya-或crp- ，都能