基因工程的理论基础与基本技术.pptVIP

尽可能提高G+C含量，以提高引物与模板的结合力，碱基随机分布,一般G+C%含量宜在45-55%左右。 ④引物的碱基组成 避免连续相同碱基排列或内部回文序列. 5’GGCAGTCTGCCAGTCTAC3’ CTGCCAGTCTAC3’ GACGG5’ T 发卡结构 1） 2） 第九十四张，课件共一百七十张，编辑于2022年5月 3）避免形成引物二聚体（dimer） 两个引物之间不能有两个以上的连续碱基序列互补。 5’GGTCTGCCAGTCTAC3’ 3’CAGGACTTAGTCACT5’ primer1 primer2 Upstream primer vs Downstream primer Sense primer vs Antisense primer Primer1 vs Primer2 Forward primer vs Reverse primer 第九十五张，课件共一百七十张，编辑于2022年5月 4） 引物3`端碱基最好选T,C,G而不选A,这样有利于延伸; 5） 为了便于后续的克隆可以在5`端加保护碱基和酶切位点。 第九十六张，课件共一百七十张，编辑于2022年5月 ⑤引物的Tm值 Tm=（G+C)?4 + (A+T)?2 当引物中的（G+C）含量低于50%时，复性温度低于55 ℃。 适当提高复性温度可以提高引物与模板