免疫荧光技术操作步骤 .docxVIP

1 / 3学习交流文档 免 免疫荧光技术操作步骤 直接免疫荧光法测抗原 基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上， 直接与相应抗原反应。 其优点是方法 简便、特异性高， 非特异性荧光染色少， 相对使用标记抗体用量偏大。 试剂与仪器 磷酸盐缓冲盐水(PBS)： 0.01mol/L，pH7.4 荧光标记的抗体溶液：以 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 进行稀释 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油 9 份+ pH9.2 0.2M 碳酸盐缓冲液 1 份配制 搪瓷桶三只(内有 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 1500ml) 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫) 荧光显微镜 玻片架 滤纸 37℃温箱等。 实验步骤 1. 滴加 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 于待检标本片上， 10min 后弃去， 使标本保持一定湿度。 2. 滴加适当稀释的荧光标记(饱和浓度可以用滴度发或公式法算出) 的抗体溶液， 使其完全覆盖标本， 置于有盖搪瓷盒内， 保温 30min 定 时间(参考： 30min)。 2 / 3学习交流文档 3 3. 取出玻片， 置玻片架上， 先用 0.01mol/L，pH7.4 的 PBS 冲洗后， 再按顺序过 0.01mol/L， pH7.4 的 PBS 三缸浸泡，每缸 3-5 min，不时振荡。 4. 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲