基因诊断与基因治疗(1).ppt

基因诊断与基因治疗 (Gene Diagnosis and Therapy) ; 基因诊断（4-18） 基因治疗（4-25）;   2013年，H7N9禽流感来袭，快速而准确地对疑似患者作出诊断，能有效的增大患者的生机。 通过什么方法作出快速诊断？如何来进行治疗？;整理ppt;; 利用分子生物学方法，直接检测基因结构及其表达水平是否异常，从而对疾病作出诊断,为治疗提供依据。 特点： 针对性强，特异性高 实用性强，诊断范围广 预见性，适应性 ;基因诊断常用技术方法;核酸分子杂交技术原理; Southern 印迹杂交法（Southern blotting ） Northern 印迹杂交法（Northern blotting ） 斑点杂交或狭缝杂交法（Spot/ Slot blot hybridization） 菌落杂交（colony hybridization） 夹心杂交法（sandwich hybridization） 原位杂交（ hybridization in situ）; (1) Southern 印迹杂交法 ;（2）Northern 印迹杂交法 （其基本过程类似于上述Southern法） 提取RNA样本→RNA变性→琼脂糖凝胶电泳分离→转移至膜→探针（标记DNA或RNA）与之杂交→显影或显色→检测信号。 Northern法可用于检测组织细胞中总RNA或mRNA ;（6）原位杂交 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交，进而 检测特异的DNA或RNA序列。 细胞原位杂交、组织切片原位杂交 DNA-DNA、RNA-DNA、RNA-RNA 优点： 不需提取核酸，故可完整保持组织或细胞的形态，因而更能准确地反映组织细胞的功能状态。;（二）聚合酶链反应（polymerase chain reaction PCR）;;（三）基因测序技术;（四）基因芯片技术;基因诊断方法; 四. 基因诊断的临床应用;镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析; 实时荧光定量PCR技术 (Real time Quantitative PCR) ;整理ppt;PCR分四个阶段;Ct value Baseline Threshold ;整理ppt;理想的PCR反应;非理想的PCR反应;在扩增产物达到荧光阈值时;整理ppt;SYBR Green I ;SYBR Green I ;整理ppt;;整理ppt;Primer Length: 15-30bp PCR Product: 100-200bp G+C%: 40～60％ Tm of primers: 55-60 ℃ Tm of probes: 65 ℃ (10 ℃) No G at 5’ ;探针中GC含量的差异对定量PCR反应效率的影响;;Methods of Quantification;Absolute Quantification;;Relative Quantification;整理ppt;斜率与扩增效率;整理ppt;;整理ppt;此课件下载可自行编辑修改，供参考！ 感谢您的支持，我们努力做得更好！