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化验员基础知识培训 主讲：李明清 第十三章 红外光谱分析法 第一节 光学分析方法概况及基本原理 第二节 比色法与分光光度法 第三节 比色条件选择 第四节 分光光度法应用 第一节 光学分析方法概况 及基本原理 一、光学分析仪器的基本组成 比色法与紫外可见分光光度法 1、信号发生器：将被测物质的某一物理或化学性质转变为分析信号； 2、检测系统：对产生的分析信号进行检测，并将其转变为易于测量的信号； 3、信号处理系统：将信号放大、平滑、滤波、加和差减、调频、调幅等； 4、信号读出系统：将信号处理系统输出的信号，记录或显示出来； 5、计算机控制系统：控制、监测与校正、采集和处理、数据储存与分析等。 比色法与紫外可见分光光度法 无论物质有无颜色，当光线通过其溶液时，会有选择地吸收一定波长的光； 溶液浓度越大，对特定波长的光的吸收程度也越大； 根据溶液对光的吸收程度确定溶液的浓度，进而确定被测组分的含量 比色法与紫外可见分光光度法 二、物质的吸光光度法（分光光度法） 四、光的吸收定律 比色法与紫外可见分光光度法 当一束单色光通过均匀溶液时，其溶液的吸光度与溶液中吸光物质的浓度和液层厚度的乘积成正比，即： A＝lg ＝lg ＝kbc 式中：k－比例常数； I0，I－入射光的强度，透过光的强度； b－液层厚度； c－溶液浓度； T－透光率（度），T＝I/I0； A－溶液的吸光度。 五、光吸收定律的适用要求： 1、光吸收定律只适用单色光； 2、光吸收定律有其适用的浓度范围； 3、被测溶液必须是均匀的。 比色法与紫外可见分光光度法 第二节 比色法与分光光度法 比色法与紫外可见分光光度法 一、比色法 以显色反应为基础，通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量。 显色反应的基本要求是：反应具有较高的灵敏度和选择性，生成的有色化合物组成恒定且较稳定，与显色剂的颜色差别较大。 比色法与紫外可见分光光度法 二、分光光度法 比色法与紫外可见分光光度法 分光光度计的基本结构：光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录。 721型分光光度计示意图 比色法与紫外可见分光光度法 三、分光光度计实验室基本要求 室温：20 ± 2 ℃ ； 温度：45% ～65%，不超过85%； 防震和防电磁干扰； 防腐性。 比色法与紫外可见分光光度法 四、分光光度计的保养和维护 光源部件：不工作不开灯、及时更换，并调好光路上的透镜和反射镜位置； 单色器不宜拆开，注意防潮； 吸收池用后冲洗干净； 光电器件应避免强光照射或受潮积尘； 保持光源及检测系统的电压稳定性。 比色法与紫外可见分光光度法 第三节 比色条件的选择 比色法与紫外可见分光光度法 一、入射光波长的选择 “最大吸收原则”和“吸收较大，干扰较小原则”。 二、测定狭缝宽度的选择 不减小吸光度时的最大狭缝宽度。 三、参比溶液的选择 溶剂空白、试样空白、试剂空白、褪色空白。 四、吸光度读数范围的选择 最好在0.2 ～0.7之间； 调节溶液的浓度； 改变液槽厚度。 比色法与紫外可见分光光度法 五、显色剂的选择 显色反应灵敏度高； 显色剂选择性好； 显色剂对照性高； 反应产物的组成恒定； 显色的产物稳定； 显色反应条件易控制。 比色法与紫外可见分光光度法 六、显色反应条件的选择 显色剂的浓度及用量； 溶液的酸度； 显色温度、显色时间、显色溶剂； 溶液中共存物的干扰及其消除。 七、溶剂的选择 低极性溶液、稳定性、无明显吸收。 比色法与紫外可见分光光度法 第四节 分光光度法的应用 比色法与紫外可见分光光度法 比色法与紫外可见分光光度法 常见无机元素分光光度法条件及参数 元素 显色剂 最大波长 /nm 测定范围 Μg/mL 条件 Al 二甲酚橙 536 0.1－1 pH＝3.4 铬天青S 567.5 0.04－1.4 pH=4-6 Ca 钙色素 520 0.1－4 pH12 Cl 铬酸银 405 5－80 pH=6－7，间接滴定 Fe 邻二氮菲 508 0.25－2.5 pH=2－9，盐酸羟胺、柠檬酸 Li 钍试剂 480 0.1－1 0.4%氢氧化钾、丙酮存在