目的重组子的筛选与鉴定(1).ppt

;阳性重组子的筛选和鉴定（检） ; ;一、根据遗传表型筛选 ;1．抗生素平板筛选; 但是除阳性重组子以外．自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的基因插入载体形成的重组子均能转化细胞而能生长，故本法仅是阳性重组子的初步筛选。; 同样还可应用插入失活双抗生素对照筛选法，在含有两个抗药性基因的载体中，通过插入失活其中一个基因，可用两个分别含有同药物的平板对照筛选阳性重组子。如pBR322质粒含有Tetr、Ampr双抗药性，插入失活Tetr后，Tet r 、Ampr为含载体的阴性菌落，Tet - 、Ampr表型的菌落为阳性，Tet - 、Amp - 的表型不能生长，对未转化的受体细胞，该方法筛选出阳性重组子的几率较高(Tetr：四环素抗性；Ampr：氨苄毒霉素抗性，Tet - ：对四环素敏感；Amp - ：对氨苄青霉素敏感);Ampicillin resistant? yes yes Tetracycline resistant? No yes;;2．?互补筛选; 因此当载体带有LacZ调节序列和编码?半乳糖苷酸N末端146个氨基酸的序列，而宿主中该部分序列缺陷、其他部分完整时，虽然宿主编码的或质粒编码的片段本身都没有活性，但它们互相协助则可在大肠杆菌内形成一个具有酶活性的蛋白质