培养基的制备实验报告_1.docxVIP

本文为Word版本，下载可编辑操作 第 第 PAGE 1 页 共 NUMPAGES 1 页 培养基的制备实验报告 篇一：《培育基的制备与消毒灭菌》 试验报告  《培育基的制备与消毒灭菌》 试验报告  试验目的  1.学习和把握配制培育基（以牛肉膏蛋白胨培育基的配制为例）的一般方法和原理。  2.了解消毒和灭菌的原理，把握常用灭菌方法的操作步骤。  试验原理  培育基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的养分基质，用以培育、分别、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类繁多，养分类型多样，加之试验和讨论的目的不同，所以培育基的种类许多。但是，不同种类的培育基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培育基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培育基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培育基时，都要依据不同微生物的要求将培育基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培育的各类养分物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培育基必需马上灭菌．假如来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和转变培育的酸碱度所带来不利的影响。  高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．连续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。  牛肉膏蛋白胨培育基是一种应用最广泛和最一般的细菌基础培育基，有时又称为一般培育基。由于这种培育基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的养分物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培育基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物供应碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要供应氮源和维生素，而NaCl供应无机盐。在配制固体培育基时还要加入肯定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培育基中琼脂的含量依据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。  由于这种培育基多用于培育细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。  牛肉膏蛋白胨培育基的配方如下：  牛肉膏 3.0g  蛋白胨 10.0 g  NaCl 5.0g  水1000ml  pH7.4—7.6  试验仪器与药品  1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／L NaOH、1mol／L HCl。  2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培育基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH 5.5-9.0）、一般棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。  试验步骤  （一）牛肉膏蛋白胨培育基的制备  1.称量（假定配制1000ml培育基）  按培育基配方比例依次精确?????地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如略微加热，牛肉膏便会与称量纸分别，然后马上取出纸片。  2.溶化  在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；假如配制固体培育基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最终补足所损失的水分。  3.调pH  在未调pH前，先用精密pH试纸测量培育基的原始pH，假如偏酸．用滴管向培育基中逐滴加入1mol／LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH，直至pH达7.4-7.6。反之，用1mol／LHCl进行调整。  4.过滤  趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些试验结果的观看。可以省去(本试验勿需过滤)。  5.分装  液体分装  分装高度以试管高度的1／4左右为宜。分装三角瓶的虽则依据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，假如是用于振荡培育用，则依据通气量的要求酌情削减；有的液体培育基在灭菌后，需要补加肯定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量肯定要精确?????。  固体分装  分装试管，其装量不超过管高的1／5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不