急性白血病免疫分型ppt课件.pptx

1 急性白血病免疫分型 . 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 2 简介 白血病免疫分型是利用单克隆抗体（McAb）对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记，检测其细胞膜及细胞浆抗原，分析其表型，以了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度，从而诊断白血病的类型。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 3 原理 造血细胞分化抗原：造血细胞分化过程中由细胞核内染色体上的基因编码的镶嵌蛋白, 存在于细胞表面和（或）细胞浆内，随着分化成熟过程不断发生改变。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 4 原理 造血细胞分化抗原出现、增多、减少或消失与造血细胞所属系列和分化程度密切相关，因而可作为鉴别和区分造血细胞的标记。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 5 原理 急性白血病细胞来自造血干/祖细胞的恶性克隆性增生，既保持造血细胞的部分性质，又有其独特的生物学和免疫学特性： （1）急性白血病主要表现在骨髓或外周血中原始幼稚细胞显著增多，正常细胞成分受抑制，因此免疫分型表现在带有某种抗原标志的细胞比例异常增多或减少，例如T-ALL时的CD7+细胞远远超过正常人的30%，而CD13+/CD33+细胞的比例降低，并可能同时伴有CD34+、TdT+细胞的异常增多； 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 6 （2）错位表达：即同一细胞出现异系列抗原混合表达，如AML细胞出现CD7、CD10抗原，ALL细胞出现CD33、CD14等； （3）抗原非同步化表达：如CD34与分化成熟较晚期的抗原不应该同步表达，但白血病细胞有时会出现CD34/CD56、CD34/CD20等同时表达的异常现象； （4）抗原丢失：如CD13、CD33是髓系最常见抗原，但少数AML却不表达或仅表达其中一项。 原理 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 7 如何进行免疫分型 选择良好的设门方法：FSC/SSC设门法,CD45／SSC设门法； 目的：排除正常细胞的干扰，将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 8 CD45是所有白细胞的抗原，其表达量与细胞分化程度具有高度相关性，即细胞分化程度高的细胞，CD45表达量高；分化程度低的细胞，CD45表达量低。 CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达CD45。 侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 9 通过CD45／SSC散点图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色甚至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型。 通常在CD45/SSC散点图上,白血病细胞群体多出现于由淋巴细胞、单核细胞、粒细胞和红细胞围成的称为“白血病窗”的区域内。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 根据骨髓细胞CD45/SSC 图中分布情况设门圈定各类细胞 R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞通常会在R4 R6 两门位置处出现 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 正常骨髓经CD45/SSC射门的散点图 CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中等强度的CD45 表达SSC 信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 表达与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低的有核红细胞和细胞碎片 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 12 单克隆抗体的选择 白血病免疫分型时尽量选用系列特异性强的单抗作为一线单抗，目前较为公认系列特异性单抗有T系的CD3、CD2；B系的CD79a、CD22 、CD19和髓系的MPO、CD117、CD13等。一般说来胞浆比胞膜的标志特异性强。用这些特异性强的标志作为初筛，基本可确定T系、 B系或髓系，随后即以二线单抗（CD14,CD36,CD41,CD34,CyIg,SmIg等）做进一步的免疫分型，以确定最后亚型。 名师归纳综合总结@欢迎下载#可编辑！！！！！ 13 各系列造血细胞表达的主要相关抗原：T淋巴细胞系：CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8； B淋巴细胞系：CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD79； 粒、单核细胞系：CD11b/c，CD13，CD14，CD15，CD33、CD64