肺结核实验室诊断(马小玲)PPT课件.pptxVIP

1 结核分枝杆菌的试验室诊断 安徽省立医院检验科 马筱玲 2 结核疫情及诊断进展 3 黛玉脸色苍白， 瘦骨嶙峋，经不断咳嗽及吐血后，香消玉殒，结束了一场哀怨凄绝的爱情故事。 4 我国结核病疫情 全球结核病第二高负担国家，结核病疫情表现有“六多” 。 一、感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口 的45％，高于全球平均水平。 二、患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率 分别为367/10万和122/10万， 三、新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145 万， 其中传染性 肺结核患者65万。 四、死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。 五、农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村， 主要在经济不发达的中西部地 区。 六、耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。 5 结核病实验室诊断方法介绍 6 概 述 结核病人的细菌学检查不仅是发现传染源的主要途径和手段，也是结核病确诊和制订抗痨方案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。 由于结核菌的遗传特性决定其生长周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。 7 实验室诊断方法 病原学诊断 辅助诊断 8 病原学诊断 一、涂片抗酸染色镜检法， 二、液基夹层杯结核杆菌检验 三、荧光染色法 四、培养法 五、液体培养＋显微镜观察药敏试验 六、快速培养检测法， 七、色谱法 八、分子生物学法 九、噬菌体生物扩增法 9 一、涂片抗酸染色镜检法： 国内大多采用厚涂片，比薄涂片法可提高阳性率；涂片萎尼抗酸染色法能保存较久，可备复查； 因费时、繁琐，综合医疗单位常因重视不够，致涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳率可达到30%。 国外痰涂片阳性率可达30%～40%，反复多次查，可增加到65%～75%； 10 涂片优点：简便、快速、价廉 11 涂片的缺点 敏感性低：5000～10000条菌／ml 特异性差：所有分枝杆菌均可着色 无法区别死菌与活菌：结果均为阳性 12 痰菌假阴性原因 病变是封闭或开放； 病变性质和其中能够排出的菌量和排出时间间歇； 结核分枝杆菌形态多样性； 13 二、液基夹层杯结核杆菌检验工作原理 将经过消化灭活处理液处理的痰液、或其他体液标本混悬液置于具有符合光学要求基片的夹层杯中，经过专业离心机离心将混悬液中细菌或细胞牢固附着基片上，并在夹层杯中直接染色后取出基片在载波片上封片，置显微镜下观察。 14 优点： 1、操作方便，易于掌握。 2、片中结核菌分布均匀，染色效果清晰 3、液基结核菌制片技术较离心浓缩集菌法有显著提高： 该方法将所有消化后标本的抗酸杆菌均完整地保留于液基薄片中，从而显著提高了检出率。 4、安全性有所提高： 消化，制片，烤片，染色均在彭氏杯中完成，操作人员不直接接触标本。 采用结核专用消化液，可有效杀灭结核分支杆菌，更好的提高了操作的安全性。 15 三、荧光染色法： 是涂片法中阳性率较高，较快速的方法， 集菌与荧光染色相结合，则荧光显微镜下的抗酸杆菌阳性率可达50%， 荧光法的缺点： 假阳性率较高， 保存时间短，不到4个月 16 四、培养法 一般都用改良罗氏固体培养基 接种后第3第7天观察，以后每周观察一次菌落生长情况，第8周若仍无生长，报告为阴性。 优点：准确，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验. 缺点：诊断周期长，最快也需要6周。 有一定的污染率 17 18 培养假阴性的原因 个别细菌营养要求的特异性； 细菌和细菌营养代谢异质性； 细菌培养前处理对细菌活性影响； 19 分枝杆菌药物敏感性试验 绝对浓度法检测分枝杆菌药敏实验是采用含药罗氏培养基进行的。常用药物终浓度（μg/ml） ____表 1 绝对浓度法含药培养基中的药物终浓度_____ 药 物 浓 度（μg/ml） 低浓度 高浓度 异烟肼 　 1μg/ml　　 10μg/ml 利福平　　　　 1μg/ml　 10μg/ml 链霉素　　　　10μg/ml　 100μg/ml 乙