动植物细胞培养产酶 (3).pptVIP

关于动植物细胞培养产酶 (3) 第1页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 主要内容 植物细胞培养产酶 动物细胞培养产酶 要求 了解动、植物细胞及其培养的特点； 熟悉动、植物细胞培养的工艺条件及其控制。 第三章 动植物细胞培养产酶 第2页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 一、概述 1.什么是动、植物细胞培养？ 动植物细胞在体外条件下的存活或生长。 2.如何获得动、植物细胞？ 动物细胞 ：离心分离、杂交瘤技术、胰蛋白酶消化处理。 植物细胞：机械捣碎或酶解、诱导愈伤组织、原生质体细胞 壁再生。 3.动、植物细胞培养方式？ 动物细胞 ：悬浮、贴壁和微载体 植物细胞 ：固体、液体浅层和液体悬浮培养。 4.动、植物细胞培养目的？ 动物细胞 ：疫苗、激素、多肽药物、单克隆抗体、酶、皮肤等人体组织、器官等功能性蛋白质。 植物细胞 ：色素、药物、香精、酶等次级代谢物。 第3页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 例：动物细胞培养获得的产物 第4页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 例：植物细胞培养获得的产物 第5页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 动、植物细胞培养和微生物细胞培养比较 第6页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 二、植物细胞培养产酶 1、从天然植物材料中直接提取 2、从大规模培养的植物细胞中提取 第7页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 1、从现成植物材料中提取酶的一般步骤 取材→预处理→加提取液捣碎→离心或过滤除去固体物， 收集粗酶液→适当浓缩→纯化→成品加工 2、植物细胞培养 在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体 培养基中，进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞， 通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种 技术。 第8页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 2、植物细胞培养 （1）植物细胞培养特点 1）提高产率 2）缩短周期 3）易于管理、减轻劳动强度 4）提高产品质量 5）其他 对剪切力敏感、生产周期长、生长和代谢需要一定的光照。 （2）植物细胞培养的工艺流程 外植体的选择和处理→愈伤组织的诱导→ 细胞的获取→细胞培养→分离纯化→产物 外植体的选择与处理： 选择外植体、切取片段、消毒处理。 植物愈伤组织 直接分离法 机械捣碎发：动作轻柔 酶分解法：纤维素酶、果胶酶等 过滤、离心分离 愈伤组织诱导法 能迅速增殖、无特定结构和功能的薄壁细胞团 外植体 半固体培养基 灭菌、冷却 生长素、分裂素 插入 培养 25℃ 愈伤组织 1-3周 分散、接种 原生质体再生 去除细胞壁后得到的微球体 第9页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 3、植物细胞培养产酶的工艺特点 培养基 （1）植物细胞的生长和代谢需要大量无机盐； （2）植物细胞需要多种维生素和植物生长激素； （3）植物细胞需求的氮源一般为无机氮源； （4）植物细胞一般以蔗糖为碳源、浓度为2-5%。 培养温度和pH 适宜温度在20℃-25℃，酶合成温度因植物种类而异； 植物细胞培养要求稳定的pH，一般控制在pH5.8-6.1最好。 通气和搅拌 耗氧速率较慢，细胞比较大，较脆弱，对剪切力敏感，所以，通气和搅拌不能太强烈。 其他 光照：对一些植物酶有诱导作用或抑制作用。 刺激物：在酶合成时期，适当添加。 第10页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 三、动物细胞培养产酶 1、从动物材料中直接提取 2、从大规模培养的动物细胞中提取 第11页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 第12页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 1、动物细胞培养的特点 （1）主要用于功能蛋白质和多肽的生产 （2）生长较慢，15-100h （3）需要添加抗生素以防染菌 （4）无细胞壁，体积较大，对剪切力敏感，要求严格控制培养条件如通风、搅拌、pH、渗透压等 （5）大部分动物细胞有锚地依赖性，需要贴壁培养 （6）培养基成分复杂，分离纯化复杂，成本较高，多用于高价值药物的生产 （7）原代细胞培养50代之后即会退化死亡，需要重新分离细胞 第13页，共17页，2022年，5月20日，12点30分，星期四 * * 单克隆抗体技术是细胞杂交技术的成功应用，正常B淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌特异抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌特异抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获198