细胞工程-课程讲义重点.docxVIP

1,细胞工程概念； 以遗传学、细胞学、发育学和分子生物学等理论为基础，借助工程学的试验方法或 技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产 品或新生物体的有关理论和技术方法的学科；2,植物细胞工程的应用； （1）在植物育种上的应用：快速获得特殊倍性材料；克服远缘杂交不亲和； 克服杂种胚早期夭折；导入外源基因； 突变体筛选；种质资源保存； （2）种苗脱毒和快速繁殖； （3）细胞培养生产有用此生代谢产物； （4）在细胞生物学和发育生物学研究中的应用； （5）在植物遗传、生理生化及植物病理等基础研究中的应用；3,细胞全能性概念； （1）概念：细胞的全能性是指生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。 （2）全能性：受精卵,生殖细胞〉体细胞；4,植物细胞分类； 分为终端分化细胞；周期细胞； GO期细胞；5,细胞脱分化概念；机理； （1）概念:培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程; （2）机理：细胞脱分化的实质是GO期细胞回复到分裂周期的过程；细胞脱分化分为3个阶段：启动阶段一一细胞质增生，液泡蛋白体出现； 演变阶段一一细胞核向中央移动，质体变为原质体 终结期一一细胞回复到分生细胞状态； 在细胞周期中存在着调节周期的复杂关键因子，主要为CDK和细胞周期 蛋白。其调控细胞分裂由GO期进入G1期，CDK活性主要通过细胞周期蛋白 调节，通过与对应的周期蛋白结合而被活化，进而调节分裂周期。 此外，还存在着CKI （周期蛋白依赖激酶抑制子），主要进行CDK活性 的负向调节。 6,生长素作用机理； （1）生长素、细胞分裂素与木质部的发生有关； （2）生长素对维管组织分化有作用； （3）生长素和细胞分裂素对于细胞生长与分化具有协同作用；（4）生长素和细胞分裂素的量和比值对细胞起重要调节作用二者的顺序不同，作用也不一 样； 7,器官发生的基因调控； （1）器官发生是多种培养因子调控及表达的结果 （2）与芽分生组织形成相关的基因已别离，并研究其调控作用（3）同源框基因（homebox）在植物发育中起重要调节作用。（分生组织分化调控基因、 不定芽形成调控基因、增强芽再生能力的基因、与芽形成前相关的基因、与器官发生 有关的基因)(4)多细胞生物的器官分化伴随着细胞分裂和生长(植物编码细胞周期依赖性激酶的基因 cdc2,对调节细胞进入分裂状态的过程起关键性作用;增强芽再生能力基因ESR1;含亮 氨酸拉链的基因bZIP;离体发生能力基因等) 8,细胞极性建立的标志一一细胞的不均等分裂；TE细胞分化及调控机理； TE：作为维管束系统的管状分子植物中，TE由根和芽的原形成层或次生形成层细胞 分化形成。 TE的出现是组织分化的标志TE分化涉及不同基因表达、激素的极性流动、细胞骨架的重排、细胞壁和细胞器变化 等。 TE细胞分化分为：第一阶段、叶肉细胞脱分化过程第二阶段：脱分化叶肉细胞向TE细胞的转分化阶段 第三阶段：TE细胞特化阶段10,影响体细胞胚发生的因素； (1)外源激素对体细胞胚发生的调控； (2)培养基及培养条件对体细胞胚形成的影响； (3)不同基因型间体细胞胚形成能力的差异； (4)外植体类型对体细胞胚形成的影响；11,体细胞胚胎发生的生化和分子基础； (1)内源生长素的变化： ①内源IAA的合成主要通过色氨酸途径，添加IAA会抑制，添加2, 4-D会提高 诱导体细胞胚的频率；②诱导初期，细胞外高浓度的生长素是必要条件； (2)体细胞胚发生过程中的特异蛋白质变化： ①胚性愈伤组织的水溶性蛋白和盐溶性蛋白高于非胚性愈伤组织，而醇溶性蛋白 低于非胚性愈伤组织；②检测到胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织的特异蛋白的相对分子质量； (3)体细胞胚形成的基因表达调控： ①体细胞胚发生的基因表达调控不仅涉及胚胎发育本身的相关基因的有序表达， 同时涉及对培养条件作出反响的相关基因表达；②已鉴定的基因表达时序分析，有三类基因： 「涉及胚性细胞转变，体细胞胚的早期形态建立的基因(ECP31、ECP40、EP2、EP3、DC9.1、EFl-a)； ＜体细胞胚发生发育的整个过程始终表达的基因，有的甚至持续到植株再生 (Gea31)；(与体细胞胚发育过程有关的基因(DC8、DC59、DC3、EMB-k DC2.1、DC7.1、 Gea41 )； 12,体细胞变异的细胞遗传学和分子遗传学基础； (1)细胞遗传学基础： ①DNA在核内重复复制：DNA核内重复复制结果形成同源多倍体； DNA核内重复复制的发生与细胞分裂周期的调控有关； DNA核内重复复制经常发生在植物的一些特殊器官； ②染色体断裂与重组：分裂中期出现断裂的染色体片段、落后染色体及染色体桥；染色体出现易位、缺失、倒位等结构变异； 染色体断裂与DNA甲基化有关；染