实验三质粒DNA的酶切.pptxVIP

会计学;概述 没有核酸限制性内切酶的发现和应用，就没有分子生物学的兴旺发展，在基因工程和分子生物学中，没有一种酶像限制性内切酶那样举足轻重和应用广泛。 限制性内切酶均来源于原核生物，它们的功能类似高等动物的免疫系统，用于抗击外来DNA的入侵。 核酸限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA的酶，即是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶。限制性内切酶作用于磷酸二酯键，使双链DNA中两条单链上的3’,5’-磷酸二酯键断裂，产生的DNA片段5’端为P,3’端为OH,是基因工程的第一步获取目的基因所必须用的酶。 ;限制性内切酶可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)DNA作用，且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机切割识别位点不远处的DNA，不产生特异片段，故在基因重组中没有应用价值。而Ⅲ类酶在特异识别位点上切割DNA分子，其切割位点在识别位点以外（很远的位点），对基因工程的意义不大。 Ⅱ类酶由两种酶组成: 一种就是通常指的限制性内切酶，它识别并切割某一特异的DNA的核苷酸序列，产生特异的DNA片段；另一种为独立的甲基化酶,它修饰同一识别序列,使A（嘌呤）甲基化。Ⅱ类酶中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用，它们是重组DNA的基础，绝大多数能识别长度为4至6个核苷酸的回文对称特