基因工程一轮复习公开课.ppt

1．1、1.2　DNA重组技术的基本工具　  基因工程的基本操作程序;(1)基因工程的诞生（A级要求） (2)基因工程的原理和技术(A级要求） (3)基因工程的应用(B级要求） (4)蛋白质工程(A级要求）;基因工程的概念;为什么基因工程能够成功呢？ ;DNA重组技术的基本工具 ;限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;限制酶所识别的序列有什么特点 ;限制性内切酶;限制酶在原核生物中的作用 ;;DNA连接酶与DNA聚合酶的比较;;基因的载体——“分子运输车”;质粒; 1、能够在宿主细胞中复制???稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害;原核细胞的基因结构(补充内容）;;;1、目的基因的获取;一、目的基因的获取;;概念：基因文库 （gene library）;基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有的基因,这种基因文库叫做基因组文库. 部分基因文库: 基因文库中包含了一种生物的一部分基因,这种基因文库叫做部分基因文库.;;基因组DNA文库与cDNA文库的比较;;（2）利用PCR技术扩增目的基因;PCR技术; 过程;(3)PCR技术与DNA复制的比较;;二、基因表达载体的构建——核心;质粒;2、基因表达载体的作用;不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。;3.基因表达载体的组成：;常用的受体细胞：;1、将目的基因导入植物细胞;（2）基因枪法;（3）花粉通道法;2、将目的基因导入动物细胞;3、将目的基因导入微生物细胞;将目的基因导入受体细胞;(四)目的基因的检测与鉴定;知识延伸——DNA分子杂交技术;返 回