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原位杂交操作流程会计学第1页/共24页冰冻切片的（DIG-labeled RNA probe）原位杂交操作程序一、 切片制备用新鲜组织制作6μm厚冰冻切片，37℃干燥1～4小时，进行下一步操作。二、 预杂交前处理预固定：4%PFA（in DEPC-PBS Ph7.4）RT 30～60min4%PFA：多聚甲醛20g 1×PBS 450ml 加热（60℃、20min）溶解 冷却后调pH至7.4 1×PBS → 500mlPBS RT 5 min×210×PBS：500ml NaCl 40g KCl 1g KH2PO4 1g Na2HPO4 7.7g DEPC水450ml 调Ph至7.5 DEPC水加至500mlPBS(含0.3%v/vTritonX-100) RT 15 min临用前配制 10%TritonX-100 15ml 1×PBS → 500ml PBS RT 5min ×2第2页/共24页消化： 2μg/mlProteinase K in TE buffer 37℃ 10 minTE： pH8.0 Tris-HCl 1M 5ml pH8.0 EDTA 0.5M 1ml DEPC水 →5