酶分离纯化学习.pptxVIP

一、生物下游加工技术;二、分离纯化的一般流程; 人干扰素、是一种重要蛋白类生物药品，具有抗癌和治疗肝炎等作用。; 在实践工作中选择方法时: 首先，应对被纯化的酶的理化性质有—个比较全面的了解; 其次，判断采用的方法和条件是否得当，始终以测定酶活性为标准。 再者，在纯化工作中，往往不宜重复采用相同的步骤和条件。 最后，要严格控制操作条件。随着酶的逐步纯净，杂蛋白含量亦逐步降低，蛋白质之间的相互作用力随之下降,酶更不稳定，因此,更要防止酶变性。;三、酶分离纯化的基本原则 （一）酶分离纯化包括三个基本环节;第6页/共110页;第一节 从发酵液制取酶提取液（酶溶液的制备）;三、细胞破碎;四、抽提;分离依据的性质;第三节 酶的沉淀分离;3、盐析操作;（2）调整盐浓度的方法;加固体（NH4）2SO4 ：;(25℃); 当溶液体积不大，要达到的盐浓度不高，可以加入饱和硫酸铵溶液；当溶液体积较大，要达到的盐浓度又较高，此时加入固体硫酸铵较好。;第17页/共110页;（二）等电点沉淀;（三）有机溶剂沉淀法;（四）复合物沉淀法;（五）选择性变性沉淀法; 借助于一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同形状和不同特性的物质颗粒或分子进行分离、提纯或浓缩的新型分离技术。;一、膜分离的类型;;各种膜分离法的原理和应用范围;（一） 微 滤(MF);（二） 超 滤(UF);（三） 反渗透(RO);（四） 电渗析; ;三、膜分离技术的基本流程;中空纤维超滤器 中空纤维膜分离装置是将成束的中空纤维装入一筒内，两端封闭。当轴流通过管腔时，造成高剪切力，在截留溶质分子的同时，将浓度降至最低限度。每根中空纤维内腔直径为0.2mm,中空纤维由惰性的非离子聚合物制成．具有各向异性、抗堵塞性，运用成束纤维表面积大，流量大、阻留溶质的浓度范围(4％一20％左右) 如右图。;中空纤维超滤膜组件;清洗液;;第36页/共110页;;;第39页/共110页;;五、膜及膜的使用性能;生物分离过程常用的膜分离技术为超滤、微滤和反渗透。为实现高效率的膜分离操作，对膜材料有如下要求： (1)起过滤作用的有效膜厚度小，超滤和微滤膜的开孔率高，过滤阻??小； (2)膜材料为惰性，不吸附溶质(蛋白质、细胞等)，从而使膜不易污染，膜孔不易堵塞； (3)适用的pH和温度范围广，耐高温火茵，耐酸碱清洗剂，稳定性高，使用寿命长； (4)容易通过清洗恢复透过性能； (5)满足实现分离目的的各种要求，如对菌体细胞的截留、对生物大分子的通透性或截留作用等。 目前市售膜的种类很多，主要有天然高分子、合成高分子和无机材料。下面简要介绍制造超滤、微滤和反渗透膜的各种膜材料。;1.天然高分子材料 主要是纤维素的衍生物，有醋酸纤维、硝酸纤维和再生纤维素等。其中醋酸纤维膜的截盐能力强，常用作反渗透膜、也可用作微滤膜和超滤膜。醋酸纤维膜使用最高温度和pH范围有限，一般使用温度低于45～50℃，pH3～8。再生纤维素可制造透析膜和微滤膜。 2.合成高分子材料 市售膜的大部分为合成高分子膜，种类很多，主要有聚砜、聚丙烯晴、聚酰亚胺、聚酰胺、聚烯类和含氟聚合物等。其中聚砜是最常用的膜材料之一，主要用于制造超滤脂。聚砜膜的特点是耐高温(一般为70～80℃，有些可高达125度)，适用pH范围广(pH1～13)，耐氯能力强，可调节孔径范围宽(1～20nm)。但聚砜膜耐压能力较低，一般平板膜的操作力极限为0.5～1.0MPa。聚酰胺膜的耐压能力较高，对温度和pH都有很好的稳定性，使用寿命较长，常用于反渗透。;3 无机材料 主要有陶瓷、微孔玻璃、不锈钢和碳素等。目前实用化的无机膜主要有孔径0.1μm以上的微滤膜和截留相对分子质量l0kD以上的超滤膜，其中以陶瓷材料的微滤膜最为常用。多孔陶瓷膜主要利用氧化铝、硅胶、氧化锆和钛等陶瓷微粒烧结而成，膜厚方向不对称。无机膜的特点是机械强度高，耐高温、耐化学试剂和耐有机溶剂，但缺点是不易加工，造价较高。 另一类无机微滤膜为动态膜(dynamic membrane)，是将含水金属氧化物(如氧化锆)等胶体微粒或聚丙烯酸等沉积在陶瓷管等多孔介质表面形成的膜，其中沉积层起筛分作用。动态膜的特点是透过通量大，通过改变pH值容易形成或除去沉积层，因此清洗比较容易，但缺点是稳定性较差。;1、若除去酶溶液中的盐分，可采用下面哪种分离方式？（ ） A、板框过滤 B、微滤 C、超滤 D、反渗透 2、若要分离除去酶溶液中的生物小分子，可采用下面哪种分离方式？（ ） A、板框过滤 B、微滤 C、超滤 D、反渗透;第四节 离心技术在酶分离纯化中的应用;相对离心力：;（二）离心机分类;料液;（三）离心方法;（四）离心沉降速度和沉降系数;（五）离心