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WB（Western Blot）原理及相关试剂 一、WB 的基本原理和用途原理： 通过电泳区分不同的组分,并转移至固相支持物,通过特异性试剂(抗体)作为探针,对靶物质 进行检测, Western blot 结合了凝胶电泳的高分辨率和固相免疫测定的特异敏感等多种特点, 可检测到低至 1～5ng(最低可到 10-100pg)中等大小的靶蛋白. 应用： Western blot 主要用于未知蛋白质的检测及抗原组分、抗原决定簇的分子生物学检测；同时也可用于未知抗体的检测和单克隆抗体的鉴定等。 二、实验操作步骤 第一步：标本的制备 绝大多数蛋白抗原的初次预实验检测可直接在 SDS 上样缓冲液中裂解组织和细胞。检测成功后，可以采用其它方法制备制备亚细胞蛋白组分（蛋白的提取可以是总蛋白、核蛋白、线粒体蛋白、膜蛋白、细胞器蛋白等）。 一般客户自己配制细胞裂解液（如RIPA 裂解液，裂解液中需要加入蛋白酶抑制剂cocktail） 来进行蛋白的提取。 Biovision 蛋白提取系列，蛋白酶抑制剂cocktail 相关产品信息 供应商 目录号 产品描述 规格 价格 Biovision K256-100 Mitochondria/Cytosol Fractionation Kit 100 assays Biovision K266-100 Nuclear/Cytosol Fractionation Kit 100 assays Biovision K267-50 Cytosol/Particulate Separation Kit 50 assays Biovision K268-50 Membrane Protein Extraction Kit 50 assays Biovision K269-500 Mammalian Cell Extraction Kit 500 assays Biovision K270-100 FractionPREP Cell Fractionation Kit 50 assays Chemicon 2910 Whole Cell Extraction Kit 100 extractions Chemicon 2145 Compartment Protein Extraction Kit 1 kit BiovisionK267-50Cytosol/Particulate Separation Kit50 assays Biovision K267-50 Cytosol/Particulate Separation Kit 50 assays 目录号产品名称供应商规格价格554-00-02 PROTEOSOL TIS EX 目录号 产品名称 供应商 规格 价格 554-00-02 PROTEOSOL TIS EX SYS,10AP KPL 10 reactions 生物素标记的蛋白 生物素标记的蛋白 MARKER 提供由 10 种生物素化的重组蛋白混合而成的蛋白MARKER 及 HRP 标记的抗生物素的抗 体，可用于 体，可用于 HRP 的显色系统的 WB 检测，尤其适用于化学发光检测，可直接在胶片上显 示 MARKER 的蛋白条带，更直接的看到目的蛋白的大小。 目录号 产品名称 供应商 规格 价格 7727L Biotinylated Protein Ladder Detection Pack CST 325 mini-blots 7727S Biotinylated Protein Ladder Detection Pack CST 65 mini-blots 第二步：SDS电泳： SDS 是一种离子性的界面活性剂 ,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水性的长碳链 .当SDS 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用. 而蛋白质结合固定比例的 SDS 后,由于SDS 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量之蛋白质带电价一致 (charge density), 所以 不同蛋白的泳动速率主要取决于亚基分子量的大小。 需要SDS、PAGE胶、蛋白质Marke（r 2×上样缓冲液（MBI）、DTT 等 相关产品 MBI 蛋白质Marke（r SM0671/SM0661/SM0441/SM043）1）、 供应商 MBI MBI 目录号 SM0431 SM0441 产品描述 Protein Molecular Weight Marker Prestained Protein Molecular Weight Marker 规格 价格 2x1000 μl 2x250 μl MBI SM0661 PageRuler? Protein Ladder 2