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1、限制性核酸内切酶——“分子手术刀”;用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图（1kb即1000个碱基对），请在指定位置画出质粒上EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。 ;2、DNA连接酶——“分子缝合针” ;3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” ;（一）目的基因的获取;3、利用PCR技术扩增目的基因：;（5）方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）;（二）基因表达载体的构建（基因工程核心）;农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法;1.农杆菌特点：;3、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： ;检测—;1、（11四川）北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是 （ ） A．过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序 B．多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白 C．过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选 D．应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达;2、（11江苏）请回答基因工程方面的有关问题 （1）利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。 ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为（ ） ②在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。 ;（2）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如图），请分别说明理由。 ①第1组： ②第2组： ;3、（2012江苏卷）;感谢您的观看！