血红蛋白的提取和分离70915.pptVIP

2003年4月14日宣布人类基因组序列图完成 这标志着进入了后基因组时代。;2;蛋白质别离的原理：;〔一〕 凝胶色谱法;3.凝胶色谱法别离蛋白质的具体过程;6;4.凝胶色谱法的原理; 〔二〕缓冲溶液; 〔三〕 电泳：;3.类型:;; 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 ;用SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量的方法;14; 二、实验操作;血红蛋白; 用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？;(1)红细胞的洗涤:;(2)血红蛋白的释放：加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟〔加速细胞破裂〕,细胞破裂释放出血红蛋白。;(4)透 析：;2.凝胶色谱操作:;〔2〕凝胶色谱柱的装填;③凝胶色谱柱的装填方法： A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。 注意： 1、凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。 2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低别离效果。; ;〔3〕样品参加与洗脱;注意：正确的加样操作是：1、不要触及并破坏凝胶面。2、贴壁加样。3、使吸管管口沿管壁环绕移动。;③样品渗入凝胶床：加样后翻开下端