大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制（医学论文资料）.doc

大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制（医学论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“临床医学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文5410字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o "1-9" \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制 1 1材料和方法 1 文2：大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制 5 1材料和方法 5 参考文摘引言： 8 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制（医学论文资料） 文1：大黄素对肝细胞模拟冷缺血再灌注损伤的保护作用及机制 1材料和方法 材料肝细胞株HL7702（中国科学院上海生命科学研究院细胞库）；RPMI(RoswellParkMemorialItitute)1640培养基（美国Gibco公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程研究所）；混合气体950mL/LN2－40mL/LCO2－10mL/LO2（西安交通大学医学院后勤中心）；大黄素，2，7二氯荧光素二脂(2，7dichlorofluorescindiacetate，DCFHDA)荧光探针（美国Sigma公司）；乳酸脱氢酶（lactatedehydrogenase，LDH），超氧化物岐化酶（superoxidedismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；流式细胞仪（FACSCabuliburTM，美国贝克曼库尔特有限公司）；Olympus倒置显微镜（IX7081FZ，日本Olympus公司） 方法 冷缺血再灌注损伤模型的建立及实验分组模拟冷缺血再灌注模型参照文献［4］的方法并加以改进：①肝细胞HL7702体外培养至对数生长期，等量均匀接种于6孔板或25mL培养瓶中，给予大黄素干预，按100，10，1μmol/L分为高、中、低浓度组和对照组（未予大黄素干预），培养24h准备实验.②模拟缺血：将培养液吸弃，等体积加入模拟缺血溶液（/L，KCl10mmol/L，/L，/L，/L，/L，乳酸钠40mmol/L，HEPES20mmol/L，，4℃）.再将培养容器放入缺氧培养装置中，充入混合气体(950mL/LN2－40mL/LCO2－10mL/LO2)，待氧分压≤1%时，同时关闭进气口与出气口，放入4℃冰箱保存8h.③模拟再灌注：取出培养容器，吸弃模拟缺血溶液，等体积加入模拟再灌注液（/L，/L，/L，NaHCO320mmol/L，/L，/L，葡萄糖55mmol/L，HEPES20mmol/L，，37℃），放入50mL/LCO2孵箱中37℃培养6h. 细胞形态学、LDH，SOD，MDA及细胞内活性氧水平检测倒置显微镜观察单纯冷缺血与再灌注后细胞形态学变化.上清液LDH含量及细胞内SOD，MDA水平严格按照试剂盒说明书操作检测.DCFHDA荧光探针负载细胞检测细胞内ROS水平，终浓度10μmol/L，37℃避光孵育30min，PBS洗涤3遍，消化至悬，流式细胞仪分析结果，阳性细胞百分率和平均荧光强度代表ROS水平. 统计学处理：数据结果用表示.采用进行统计分析.统计方法采用单因素方差分析，多重比较用LSDt检验.P<为差异具有统计学意义. 2结果 倒置显微镜下细胞形态学改变再灌注后6h细胞形态较单纯冷缺血8h时损伤加重，倒置显微镜下可见细胞变圆、轮廓模糊、形态不规则、皱缩、漂浮细胞增多（图1） A：单纯冷缺血8h后；B：冷缺血8h再灌注6h后. 图1冷缺血再灌注后细胞形态学改变RM×100（略） 上清液LDH，细胞内MDA水平及SOD活性变化上清液中LDH及细胞内MDA含量高、中浓度大黄素处理组均低于对照组，而细胞内SOD活性高于对照组，差异具有统计学意义（P<）；随着大黄素浓度的增加，LDH，MDA水平逐渐降低，SOD活性逐渐增高，各浓度大黄素处理组之间差异具有统计学意义（P<，表1） 表1上清液LDH、细胞内MDA，SOD及ROS水平检测结果（略） aP 细胞内ROS水平变化流式细胞技术分析结果显示，ROS水平大黄素处理组较对照组显著降低，差异具有统计学意义（P<）；随大黄素浓度增加，ROS水平有降低的趋势，各浓度大黄素处理组之间差异具有统计学意义（P<，表1）；从100，10，1μmol/L浓度组到对照组，可见流式图峰值逐渐右移，细胞内活性氧水平逐渐增高（图2） A：100μmol/L大黄素组；B：10μmol/L大黄素组；C：1μmol/L大黄素组；D：对照组. 图2模