荧光的猝灭解析.pptVIP

* . * . * 测定H+ 及金属离子的PET原理 . * 基于PET原理测定焦磷酸的荧光传感器分子 . * PET-1 , Its fluorescence quantum yield increases from 0.003 to 0.14 upon binding of K+ in methanol. . * PET-2, containing a water-soluble polyazamacrocycle, was designed for the recognition of soft metal ions like ZnII. This compound is sensitive to pH because of the protonability of the aliphatic nitrogen atoms. At pH 10, the fluorescence intensity of this compound increases 14-fold upon addition of ZnII. . * 测定Zn2+ . * in PET-3a and PET-3b, the pKa is lowered and the intensity changes are comparable at pH 10 and pH 7. The Zn2+ complexes are thus fluorescent at physiological pH. Moreover, the PET-3a and PET-3b (containing fluorescein and dichlorofluorescein moieties) are excitable in the visible and are thus more appropriate for biological applications. . * . * . * 共振能量转移过程的两个最重要的判断标准是： （1）能量转移应当发生在远大于碰撞半径的距离上发生； （2）能量转移效率与介质的粘度变化无关。 . * . * . * RET的应用（2）－－分子构象变化的探测 基于E和r的关系，利用R0和实验测得的E，可求得供体和受体之间的距离，该方法对于研究分子内和分子间的构象变化非常有用。其方法是在一个生物大分子或两个相互作用的分子上分别标记两个能发生RET的荧光团，通过测量E，就可确定两点间的距离。由于相对取向和光谱重叠积分的不确定因素，该方法不能准确测定绝对距离，但可通过监测供体－受体的相对距离变化，结合时间变化，可以推测出大分子在生命活动中的构象变化。 . * . A Novel Hg2+ Selective Ratiometric Fluorescent Chemodosimeter Based on an Intramolecular FRET Mechanism J Fluoresc 2008，18，1187 例1. * . A Novel Design Method of Ratiometric Fluorescent Probes Based on Fluorescence Resonance Energy Transfer Switching by Spectral Overlap Integral 例2. Chem. Eur. J. 2003, 9, 1479. * . * 吸收光谱变化 荧光光谱变化 . 3. 交换能量转移猝灭 交换能量转移是发生在比共振能量转移更短的距离内的能量转移现象，这种能量转移也称为短距离能量转移。其特征是： （1）只有当供体分子和受体分子两者的电子云相互接触时，这种能量转移的形式才是重要的。在这种情况下，供体分子和受体分子之间能量最高的电子可能相互交换位置，也就是说，激发态供体分子的光电子可能改变位置成为原先处于基态的受体分子的电子结构部分，而供体分子又从基态受体分子那里交换取得一个电子从而返回到基态。交换能量转移的速率是扩散控制的，因而其速率与介质的粘度有关。 （2）交换作用的大小与供体及受体的跃迁概率无关。对于如单重态－三重态这样的禁阻跃迁来说，在短距离的间隔内，交换能量转移过程将占支配的地位。 * . * 交换能量转移过程中，必须遵守Wigner的自旋保守规则，即始态和终态的总自旋保持不变。因此，最重要的交换能量过程有如下两种形式： . * 4. 分子内能量转移 能量转移不仅能够发生在两个分子之间，也可能发生在同一分子中的两个发色团之间。 . * . * . * （photo-induced electron transfer, PET)