琼脂糖凝胶电泳原理.pptxVIP

琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同，电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 第1页/共12页 琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 胶床准备 静置 铺胶 凝胶准备 第2页/共12页 琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 第3页/共12页 结果初步分析 数量分析：条带的宽度， 荧光的亮度。 质量分析：纯度 分子量 琼脂糖凝胶电泳结果分析 影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大 第4页/共12页 凝胶电泳结果分析 常见问题 原因 对策 DNA条带模糊 DNA降解 实验过程中应避免核酸酶污染。 电泳缓冲液陈旧 电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。TBE建议使用10就更换。 第5页/共12页 所用电泳条件不