段珍珍的（动物细胞融合与单克隆抗体）一等奖 公开课PPT课件.ppt

2.2 动物细胞工程 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 材料: 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？ 人-鼠(想像图) ⑴自然发生： 受精卵 ⑵人工诱导： 利用诱导剂诱导动物细胞融合 诱导因素：聚乙二醇、灭活的病毒或电激等。 细胞融合是正常的生命活动 A细胞 B细胞 人工诱导 1.动物细胞融合的概念 杂交细胞 动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指两个或多个细胞融合形成一个单核细胞的过程。 一、动物细胞融合 正在融合的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞 正在融合的鸡血细胞 2.动物细胞融合的原理： 细胞膜的流动性 灭活病毒、PEG、电激等 融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞 诱导的手段？ 融合后细胞的类型？ AB杂种细胞遗传物质 有什么特点？ 三种AA、AB、BB（A、B） 含两种生物的遗传物质 3.融合过程 为什么灭活的病毒能作诱导剂？ 灭活丧失感染性 保留融合活性 灭活病毒诱导细胞融合的原理： 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。 P52生物技术资料卡 灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合 4.意义和应用 强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞 抗体：能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。 能产生抗体的细胞是浆细胞（即效应B细胞）。 二、单克隆抗体 B淋巴细胞 效应B淋巴细胞 记忆B淋巴细胞 分化 抗体的传统生产方法 抗原 (不纯) 反复注射动物 从动物的血清中分离抗体（不纯） 该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 单克隆抗体！ 读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。 2.1单克隆抗体的概念 单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体 每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一，特异性强的抗体。 如果利用单个B淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体——单克隆抗体。 问题： 怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？ 提示1：仅仅对B细胞进行细胞培养可行吗？ 提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？ 问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。 2.2单克隆抗体的制备过程 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖 杂交瘤细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合技术 单克隆抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验 BB 、B瘤 、瘤瘤 （B、瘤） （一选）选择性培养基：只有杂交瘤细胞才能存活 获得产生相应抗体的B细胞 （二选）：选能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞 √ 体外培养 小鼠腹腔内培养 杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖。 单克隆抗体 杂交细胞 杂交瘤细胞 骨髓瘤 细胞 特异性杂交瘤细胞 杂交瘤细胞系 提取 经过免疫的 B淋巴细胞 动物细胞融合技术 动物细胞培养技术 单克隆抗体的制备过程： 特点：既能产生专一抗体，又能大量繁殖 特点：特异性强，灵敏度高，可大量制备 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。 ②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，可是能不断分裂增殖。 你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？ 小资料： 在培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖细胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途径阻断，仅有 D 合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的 S 途径合成DNA而增殖。 通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，再由这些单细胞克隆生长，然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩