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(二)核糖体的功能 核糖体是翻译进行的场所------合成多肽/蛋白质。 在单个核糖体上,含有多个功能活性中心,在蛋白质合成过程中各有专一的识别作用和功能。核糖体上至少有5个活性中心。 mRNA结合部位—— 小亚基 结合或接受AA-tRNA部位(A位)——大亚基 结合或接受肽基tRNA的部位——大亚基 肽基转移部位(P位)——大亚基 形成肽键的部位(转肽酶中心)——大亚基 此外,还有负责肽链延伸的各种延伸因子的结合位点。 核糖体小亚基负责对模板mRNA进行序列特异性识别;大亚基负责携带氨基酸及tRNA的功能,肽键的形成、AA-tRNA、肽基-tRNA的结合等,A位、P位、转肽酶中心等主要在大亚基上。 第二节 蛋白质的合成 ( Protein Synthesize ) 蛋白质的合成过程包括: 氨基酸活化 肽链的起始 肽链的伸长 肽链的终止 多肽链的加工和折叠 一、原核生物蛋白质合成过程(细菌) (一)氨基酸的活化 在氨酰-tRNA合成酶的作用下生成活化氨基酸——AA-tRNA。 氨基酸 + tRNA 氨基酰- tRNA ATP AMP+PPi 氨基酰-tRNA合成酶 氨酰-tRNA的表示方法: Ala-tRNAAla Ser-tRNASer Met-tRNAMet 起始密码子: AUG(多数)或 GUG (少数) 起始氨基酸是:甲酰甲硫氨酸 起始AA-tRNA是:N-甲酰甲硫氨酰-tRNA fMet‐tRNAfMet 起始tRNA是:tRNAfMet 活化步骤分为两步: 第一步: 第一步: 1、起始密码子与起始 tRNA 2、内部AUG和GUG密码子的识别 延伸tRNA:tRNAMet和tRNAVal 延伸AA-tRNA:Met-tRNAMet和Ala-tRNAVal 合成氨基酸:甲硫氨酸(AUG)和缬氨酸(GUG) 起始tRNAfMet和延伸tRNAMet 在结构上存在差异,结构上的差异保证了正确的识别! (二) 翻译的起始(翻译起始复合物形成) mRNA:模板和核糖体识别(SD序列) 核糖体:30S小亚基、 50S大亚基 活化的起始tRNA:fMet-tRNAfMet 翻译起始因子(Initiation factor, IF):IF-1、IF-2、IF-3 其他:GTP、Mg2+ 1、所需成分(细菌): 2、SD序列 SD序列:Shine和Dalgarno发现,起始密码子上 游约4-10个核苷酸处一段富含嘌呤的序列,可与16S rRNA 3ˊ-OH核苷酸互补。 保守序列为:5′-AGGAPuPu-3′ 3、翻译起始因子(Initiation factor, IF) IF1:阻止tRNA进入A位。 IF2:生成fmet复合物,催化起始tRNA进入核糖体小亚基P位,反密码子与密码子结合。 IF3:具有解离活性,使70S核糖体解离为30S和50S亚 基; 定义:参与蛋白质生物合成起始的蛋白因子。 原核生物中IF的种类和功能: 1、30S核糖体小亚基与起始因子IF–3相结合,使得核糖体大小亚基分离;IF-1进入A位;IF-2-GTP与IF-1结合;30S小亚基通过SD序列与mRNA模板相结合。 翻译起始(翻译起始复合物形成)又可被分成3步: IF-2 GTP A U G 5 3 IF-1 IF-3 2、在IF-2和GTP的帮助下,fMet-tRNAfMet进入小亚基的P位,tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对。 A U G 5 3 IF-1 IF-2 GTP IF-3 3、IF3被释放,50S大亚基与带有tRNA、mRNA和2个翻译起始因子的小亚基复合物结合,IF-2水解GTP,释放IF-1和IF-2因子。 A U G 5 3 IF-3 IF-2 GTP GDP Pi IF-1 70S起始复合物 A U G 5 3 IF-2 GTP IF-2 -GTP GDP Pi 原核生物:30S小亚基首先与mRNA模板相结合,再与fMet-tRNAfMet结合,最后与50S大亚基结合,形成70S的起始复合物。 IF-1 IF-3 (三)肽链的延伸 肽链的延伸以氨酰-tRNA进入70S复合物的A位为标志。 延伸过程由许多循环组成,每加一个氨基酸就是一个循环,每个循环包括: AA-tRNA与核糖体结合(进位)、肽键的生成(转位)和tRNA与mRNA相对核糖体的移动(移位)。 肽链延伸的基本要求 : 完整的起始复合物; 氨基酰-tRNA; 延伸因子(Elongation factor,EF); GTP。 延
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