DB13_T1384_4-2011饲料中新霉素的测定.docxVIP

ICS 65.120 B 46 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB13/T 1384.4—2011 饲料中新霉素的测定 Determination of neomycin in feed 2011 - 05 - 10 发布 2011 - 05 - 20 实施 河北省质量技术监督局 发 布 DB13/T 1384.4—2011 DB13/T 1384.4—2011 I I 前 言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。本标准由河北省质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、石家庄市疾病预防控制中心、北京出入境检验检疫技术中心、河北医科大学、河北省饲料产品质量监督检验站。 本标准主要起草人：张岩、张宏、李挥、杨立学、丛斌、卢晓宇、吕品、李志平、沈磊、贾茜、马春玲、米振杰、李强、高振同、武英利。 PAGE PAGE 1 饲料中新霉素的测定 范围 本标准规定了饲料中新霉素的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于饲料中新霉素的测定。 本标准的方法检出限为40 μg/kg。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682－1992，neq ISO 3696:1987) 原理 试样经提取，高速离心后再用 CBX 固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定，子离子丰度比定性，外标法定量。 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 甲醇：色谱纯。 七氟丁酸酐（HFBA）：优级纯。 三氯乙酸。 磷酸二氢钾（KH2PO4）。 盐酸。 二水合乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2 H2O）。 样品提取液（10 mmol/L KH2PO4 溶液，含 0.4 mmol/L EDTA 和 2％三氯乙酸）：准确称量 1.36 g KH2PO4 于1 000 mL 容量瓶中，加入少量水，用盐酸调 pH 至 4.0，再加入 1.5 g Na2EDTA·2 H2O 和20 g 三氯乙酸，用水定容至刻度，混匀即得。 氢氧化钠 新霉素标准品：纯度≥99％。。 新霉素标准储备溶液：分别称取经折算相当于 0.010 0 g 新霉素的标准品，用水溶解定容至 100 mL，溶液浓度为 100 g/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期 1 个月。 空白样品提取液：用不含链霉素的样品，按照 6.1 和 6.2 制备空白样品溶液。 新霉素标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成 15 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、250 ng/mL、300 ng/mL 的混合标准工作溶液，相当于样品中含有 6 g/kg、10 g/kg、20 g/kg、100 g/kg、120 g/kg 新霉素，现配。 CBX 阳离子交换柱，或相当者：500 mg，6 mL。 乙酸。 10％乙酸甲醇溶液：准确量取 10 mL 乙酸于 100 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀即可。 100 mmol/L HFBA 水溶液：准确量取 6.5 mL 七氟丁酸酐，用水稀释至 500 mL（4℃避光保存6 个月）。 20 mmol/L HFBA 水溶液：准确量取 100 mmol/L HFBA 溶液 50 mL，用水稀释至 250 mL（4℃ 避光保存 6 个月）。 5 mmol/L HFBA 水溶液：准确量取 20 mmol/L HFBA 溶液 25 mL，用水稀释至 100 mL（4℃避光保存 6 个月）。 20 mmol/LHFBA 乙腈溶液：准确量取 1.3 mL 七氟丁酸酐，用乙腈稀释至 500 mL（4℃避光保存 6 个月）。 仪器和设备 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。 微孔滤膜。 pH 计。 高速离心机。 旋涡混匀器。 固相萃取装置。 测定步骤 提取 准确称取样品 1 g（精确到 0.01 g）至 10 mL 离心管中，加样品提取液 10 mL，旋涡混匀 10 min， 12 000 r/min 离心 10 min，移出上清液。重复提取一次，合并上清液，调 pH 至 8.0，12 000 r/min 离心 10 min，取上清液备用。 净化 将上清液移入 CBX 柱（使用前分别用 5 mL 甲醇、5 mL 水预处理，保持柱体湿润）。溶液以 2.0 mL /min 的流速过柱，然后依次用水淋洗，减压抽干 20 min。用 10％乙酸甲醇溶液 5 mL 洗脱，收集洗脱液于 40℃下氮气吹干。用 5 mmol/L HFBA 水溶液 0.5 mL 溶解残渣，15 000 r /min