ELISA组织样本的处理.docxVIP

ELISA组织样本的处理 1、采集组织：在冰冷的生理盐水中漂洗组织，除去血液，滤纸 拭干，称重（lOOmg左右为宜），剔除附属的结缔组织，称取组织块。 2、用移液管量取0. IM PBS或者用0.86%冷生理盐水，组织： 匀浆介质=1:10 （或所用生理盐水的体积总量为组织块重量的9倍）， 尽量保证样本间所取组织重量和加入匀浆介质（PBS或生理盐水）的 比例一样o然后用眼科小剪尽快剪碎组织块（操作要在冰水浴中进行）o3、组织匀浆： a）玻璃匀浆器：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中，再将剩余的 1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块，一起倒入匀 浆管中进行匀浆，左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中, 右手上下抽动或转动研磨杆数十次（6?8分钟），充分研碎，使组织 匀浆化。 b）组织匀浆/破碎机：用组织破碎机10000?15000r/min上下研 磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10 秒/次，间隙30秒，连续3?5次，在冰水中进行），皮肤、肌肉组织 等可延长匀浆时间。 4、将制备好的10%匀浆用离心机4℃, 5000g离心5?好min, 收集各匀浆样本上清。 5、BCA法测定各组织匀浆样本总蛋白量，便于后续统计分析数 据。 6、将提供的上清分装成适量小份，按需保存备用: 4c下，可保存不超过72小时；-20℃下，可保存不超过1个月； -80℃下