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第三节 自动生物化学分析仪常用分析方法 第三十页,共五十五页。 一、分析方法的种类 (一)终点分析法(平衡法) 终点分析法是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小,对物质进行定量分析的一类方法,它是实验室最常用的方法之一。 第三十一页,共五十五页。 一点终点法:一点终点法的特点是使用一种或两种试剂。当样品和试剂混合后,待测物与试剂的物理化学反应达到终点时,测定吸光度,计算待测物的浓度。该法具有代表性的试验有:总蛋白、清蛋白、葡萄糖氧化酶法等。 第三十二页,共五十五页。 两点终点法:两点终点法也称固定时间法,它可以用一种试剂,也可以用两种试剂。该方法的优点是可以消除样品、试剂的颜色、浊度,以及一些干扰物质对测定的干扰。 第三十三页,共五十五页。 双波长法:其原理是检测计在对一待测物进行检测时,同时用两个波长检测,用主波长的吸光度减去副波长的吸光度,标准物与待测物同等对待,计算待测物的浓度。 第三十四页,共五十五页。 (二)连续监测法 测定底物的消耗或产物生成速度的化学方法称为连续监测法。它是通过适当的仪器,连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的多点数据,求出酶反应初速度,间接计算酶活性浓度。 第三十五页,共五十五页。 具体方法有: 1.两点速率法 2.多点速率法 3.回归法 4.带速率时间法 第三十六页,共五十五页。 (三)比浊测定法 通过检测物质对光的散射或透射强度来测定物质的方法称比浊法。免疫透射比浊法是自动生物化学分析仪常用方法。目前常用的免疫比浊法主要用于血清特种蛋白的检测,如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白、免疫球蛋白以及某些药物监测等。 第三十七页,共五十五页。 (四)均相酶免疫分析法 该类方法是以生物体内某种特异性很强的结合反应作为测定基础,在结合反应中可将某种参加反应的反应物用标记物加以标记。利用酶作标记物,以抗原抗体相互结合的免疫反应为基础的方法称酶免疫分析法。 第三十八页,共五十五页。 二、自动生物化学分析仪实验参数的设置 主要包括样品量、试剂量、测定方法、校正方法、反应时间、测定波长和控制因素等。 第三十九页,共五十五页。 * * 第二章 自动生物化学分析仪的应用与原理 第一页,共五十五页。 自动生物化学分析仪的特点: 精密度高,功能齐全; 可进行吸光度、浓度和酶活力的测定,能使用终点法和连续监测法进行分析; 具有快速、简便、微量、标准化、样品和试剂用量低等优点。 第二页,共五十五页。 第一节 自动生物化学分析仪的类型 第三页,共五十五页。 ①按反应装置的结构可分为连续流动式、离心式、分立式和干片式四类。 ②按自动化程度可分为全自动和半自动型。 ③按同时可测定项目可分为单通道和多通道两类。 ④按仪器的复杂程度及功能可分为小型、中型和大型三类。 第四页,共五十五页。 一、连续流动式自动生物化学分析仪 连续流动式自动生物化学分析仪是第一代自动分析仪,在测定过程中各待测样品与试剂混合后的化学反应均在同一管道内流动的过程中完成。 第五页,共五十五页。 (一)仪器结构 仪器主要构成部件有:样品盘、比例泵、混合器、透析器、恒温器及检测装置组成。 第六页,共五十五页。 (二)工作原理 在微机控制下,通过比例泵将标本和试剂注入到连续的管道系统中,在一定的温度下,在管道内完成混合,去除干扰物,保温,比色测定,信号放大,运算处理,最后将结果显示并打印出来。 第七页,共五十五页。 二、离心式自动生物化学分析仪 离心式生物化学分析仪是1969年发展起来的一种机型,它的全部检验过程是在一个类似离心机转头样的圆盘上完成的。 第八页,共五十五页。 (一)仪器结构 离心式分析仪由加样和分析两个部分组成,加样部分:包括样品盘、试剂盘、吸样臂、试剂臂和电子控制部分等。分析部分:除安装有特殊的离心转盘外,还有温控和光学检测系统,以及微机信息处理和显示系统。 第九页,共五十五页。 第十页,共五十五页。 (二)工作原理 先将样品和试剂分别置于转盘相应的凹槽内,当离心机开动后,受离心力的作用,试剂和样品相互混合发生反应,经适当的时间后,各样品最后流入转盘外圈的比色凹槽内,通过比色计检测。 第十一页,共五十五页。 三、分立式自动生物化学分析仪 分立式自动生物化学分析仪是目前国内外多采用的设计模式,因具有结构简单、检测速度快的特点,新设计开发的仪器已少采用连续流动式和离心式。 第十二页,共五十五页。 (一)工作原理 分立式自动生物化学分析仪是按人工操作的方式编
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