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人工栽培蛹虫草液体菌种发酵工艺优化 　　摘要：近年，随着人工栽培蛹虫草面积逐年扩大，迫切需求大规模培育蛹虫草菌种，尤其是液体菌种来满足日益扩大的再生产的需要。采用正交试验设计，选取ph值、温度、通气量3个因素，每个因素设置3个水平，进行液体菌种发酵工艺试验，分析蛹虫草子实体生长影响及生物转化率变化情况。通过试验得到人工栽培蛹虫草液体菌种发酵的最佳组合条件。不同处理对蛹虫草子实体生长有明显变化，3种因素对蛹虫草的生物转化率影响为：温度通气量ph值，其最优组合为温度20℃、ph值5.5、通气量2l/min。 　　关键词：蛹虫草;子实体;液体发酵;工艺优化 　　中图分类号：s567.3+50.4文献标志码：a 　　文章编号：1002-1302（2020）05-0143-05 　　近年来，由于野生虫草（cordycepsmilitaris）过度开采造成产量急剧下降且使其生长环境遭到破坏，人工栽培蛹虫草面积逐年扩大，这就迫切需求大规模培育蛹虫草菌种，尤其是液体菌种来满足日益扩大的再生产的需要。国外已进行了蛹虫草人工栽培相关技术的研究，采用仿生栽培、固体培养基栽培、液体培养基培养等多种方式进行了人工培养并得到了蛹虫草的子实体[1-2]。深层发酵技术目前已运用到食品、药剂等产品生产方面，kitakaze等和vinadé等在蛹虫草液体培养方面做了大量的工作[3-4]。国内学者对蛹虫草液体发酵技术进行了相关研究，任昕雯等以大米、啤酒糟共培养的蛹虫草固态发酵产物为原料，利用响应面法优化提取条件研究了液体发酵条件对蛹虫草产虫草素的影响[5]。张楠等对蛹虫草深层发酵产虫草素培养基进行了优化[6]。秦鹏等研究了不同添加物对蛹虫草液体发酵虫草素的影响，确定了3种生长素使用的最佳质量浓度，并对各质量浓度下蛹虫草生长情况进行了分析与讨论[7]。蛹虫草液体发酵相关研究大多是针对其某一影响因素进行了探讨，但针对蛹虫草菌种资源用于液体发酵的研究仍较少。结合新疆伊犁当地实际，本研究利用新疆蛹虫草菌种，采用正交试验设计，选取ph值、温度、通气量3个因素，每个因素设置3个水平，研究液体菌种发酵对蛹虫草产子实体生长的影响，分析蛹虫草生长情况及生物转化率。进一步掌握蛹虫草液体菌种扩大发酵的最佳工艺条件，提供优质蛹虫草液体发酵菌种，满足伊犁乃至新疆地区大面积规模化人工栽培蛹虫草的需要。 　　1材料与方法 　　1.1供试材料 　　1.1.1供试菌株 　　供试菌株均来源于笔者实验室，人工筛选获得的mat1-1和mat1-2不同交配型代表菌株[8]。 　　1.1.2供试培养基 　　改良pda固体培养基：参照努尔买买提[9]等所述方法。 　　改良pd液体培养基（g/l）：马铃薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、磷酸二氢钾（kh2po4）2g、七水硫酸镁（mgso4·7h2o）1g和复合维生素b25mg，ph值6.5～7.0。 　　种子发酵培养基采用改良pd液体培养基。 　　1.1.3供试培养设备与介质 　　liflusgx多功能生物发酵系统、组培玻璃瓶（规格：350ml，高108mm，直径75mm，口径69mm）、人工栽培基质大米等。 　　1.2液体菌种发酵 　　1.2.1种子液制备 　　将不同遗传交配型代表菌株无菌接种至改良pda培养基，于21℃下恒温光照培养15d后，用灭菌牙签挑取分生孢子，接种至含有50ml改良pd液体培养基的锥形瓶中，170r/min，21℃恒温下摇培3～4d后备用。 　　1.2.2发酵罐调试与灭菌 　　進行溶氧电极（inpro6800）准备;按照要求配制不同ph值校准液对ph值电极405-bpasph值进行校准;将每个相关部件都安装到发酵罐对应位置上，121℃下灭菌20～30min，再快速移至无菌操作台下备用。 　　1.2.3发酵培养 　　在无菌条件下先倒入灭菌的pd培养基于发酵罐中，将不同遗传交配型的种子液等体积混合，再按发酵液体培养基∶种子液=（10～15）∶1（体积比）的比例，加入适量的混合种子液于发酵罐中;开通各个电源，通过蠕动泵调节对应条件的酸、碱量;按不同处理的发酵条件分别进行发酵培养，每个处理培养3～4d，当发酵罐中菌丝球布满培养液时发酵完成。 　　1.2.4发酵液保存 　　将不同处理的发酵液体菌种无菌条件下倒入已灭菌的玻璃容器内现用，或放入4℃冰箱暂时保存备用。 　　1.3人工栽培 　　1.3.1栽培培养基灭菌 　　参照努尔买买提等的方法[9]，每个组织培养瓶装入20g大米，加入15ml改良pd培养基，摇均加盖后放入大灭菌锅内，