大肠菌群计数.pptVIP

从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。 BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。 证实试验 第29页，共40页，编辑于2022年，星期三 结果报告 经最后证实为大肠菌群阳性的BGLB管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g (mL)样品中大肠菌群数 。 例：10-4样品稀释液1ml在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取10个接种BGLB肉汤，证实6个为阳性。则样品大肠菌群数为： 100×6/10×10-4/g(mL)=6.0×105cfu/g(mL) 第30页，共40页，编辑于2022年，星期三 第1页，共40页，编辑于2022年，星期三 大肠菌群的定义 指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌群主要来源于人畜粪便, 作为粪便污染指标评价食品的卫生状况, 推断食品中肠道致病菌污染的可能。 大肠菌群不是细菌学上分类命名，而是一组与粪便污染有关的细菌。这群细菌包括：大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。 生化特征及血清学反应并非完全一致。 第2页，共40页，编辑于2022年，星期三 分布： 广泛分布于自然环境。 来源于人和温血动物的粪便。 卫生学意义 大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。 大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪便污染的程度。 表示对人体健康是否具有潜在的危险性。 第3页，共40页，编辑于2022年，星期三 大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌 是人类和温血动物肠道菌群，在数量上占优势。 随粪便排出体外后，在外界环境影响下，其存活时间应与肠道致病菌大致相似或稍长。 检验方法简便，易于检出与计数。 对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。 第4页，共40页，编辑于2022年，星期三 主要修改内容 将原标准拆分为大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌计数三个独立的标准方法，标准名称变化。 大肠菌群的MPN法中乳糖胆盐等培养基改为月桂基硫酸盐胰蛋白眎(LST)肉汤为主的培养基； 增加了对样品匀液的pH范围要求； 增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法； MPN法的结果报告由原“每100g（mL）大肠菌群的MPN值”，修改为“每1 g（mL）大肠菌群的MPN值”； 第5页，共40页，编辑于2022年，星期三 大肠菌群计数 第一法：MPN法 第二法：平板计数法 第三法：Petrifilm测试片法 第6页，共40页，编辑于2022年，星期三 第一法 大肠菌群检验MPN法 第7页，共40页，编辑于2022年，星期三 原标准 乳糖胆盐发酵管 EMB琼脂 乳糖发酵管 培养基改变情况 新标准 第一法： 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 第二法： 结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 第8页，共40页，编辑于2022年，星期三 操作步骤的改变 原标准 初发酵 EMB分离培养 染色，复发酵 报 告 现标准 LST初发酵 BGLB验证 报 告 第9页，共40页，编辑于2022年，星期三 大肠菌群检验程图(新国标MPN法) 检样 稀释 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h 不产气 产气 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h 不产气 产气 大肠菌群阴性 大肠菌群阳性 报告 第10页，共40页，编辑于2022年，星期三 样品的处理和稀释 固体和半固体食品：以无菌操作取25g）样品,放入装有225 mL生理盐水的无菌均质杯内,于8000 r/min均质1min～2min,制成1:10样品匀液，或放入225 mL生理盐水的无菌均质袋中，用均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 液体食品：以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌玻璃瓶(瓶内预置适当数量的玻璃珠)中,以30cm幅度、于7s内振摇25次(或以机械振荡器振摇),制成1:10的样品匀液。 第11页，共40页，编辑于2022年，星期三 根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时要进行调节，如有些果汁pH值很低，如果不进行调节，检验结果的误差可能就会比较大。 第12页，共40页，编辑于2022年，星期三 选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。 36℃±1℃培养24