细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

HVJ促融机制： 当病毒位于两个细胞间时，病毒表面spike上神经氨酸酶降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部聚集在病毒周围，在高pH和Ca2+条件下局部细胞膜发生融合。 2.化学融合剂促进细胞融合 1975年Kao和Chayluk报道PEG(polyethylene glycol,PEG)可促进细胞融合， Pontecorvo报道PEG促融效率高于仙台病毒100-300倍。 PEG是一种多聚化合物，商品名卡波蜡Carbowax,分子量200－20000，靠醚键的联结使其分子末端带弱负电荷，目前已衍生达50多种。 聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合 原理：PEG带有大量的负电荷,和细胞膜表面的负电荷在Ca2＋的连接下，形成静电键，促使异源的细胞膜间的粘着和结合，在高pH,高Ca2＋溶液的作用下，将Ca2＋和与质膜结合的PEG分子洗脱，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种细胞膜上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。 注意事项 1 PEG融合的关键是作用时间 2 PEG规格和纯度与融合效率有关 3 融合与细胞密度有关 4 融合液中加入少量CaCl2，即维持一定电导率，对细胞也有保护作用 3.电融合技术（Electroporation） 一、何谓单克隆抗体？ 只针对某一抗原决定簇的抗体分子称为单克隆抗体