蛋白类酶的分离纯化.pptVIP

3.6 酶的浓缩、干燥与结晶 浓缩与干燥都是酶与溶剂（通常是水）分离的过程。在酶的分离纯化过程中是一个重要的环节。 离心分离、过滤与膜分离、沉淀分离、层析分离等都能起到浓缩作用。用各种吸水剂，如硅胶、聚乙二醇、干燥凝胶等吸去水分，也可以达到浓缩效果。 蒸发浓缩是通过加热或者减压方法使溶液中的部分溶剂汽化蒸发，使溶液得以浓缩的过程。由于酶在高温条件下不稳定，容易变性失活，故酶液的浓缩通常采用真空浓缩－即在一定的真空条件下，使酶液在60℃以下进行浓缩。 凝胶层析操作过程 凝胶层析的操作一般包括装柱、上柱、洗脱等过程 装柱：柱内先充满洗脱剂，然后一边搅拌一边缓慢而连续地加入浓稠的凝胶悬浮液，让其自然沉降，分布均匀无气泡和裂缝，直至所需高度。装好后洗脱液浸没凝胶表面。 上柱：在洗脱液的液面恰好与凝胶床的表面相平时加入混合液。混合液体积通常为凝胶床体积的10%左右，浓度可高些，黏度应低。 洗脱：洗脱液应与干燥凝胶溶胀时及装柱平衡时使用的一致，体积一般为凝胶床体积的120%，洗脱流出液分步收集。 凝胶层析操作过程（详见蛋白质工程p213） 洗脱完毕后，凝胶柱已经恢复酶液上样前的状态，不需再生处理就可以重复进行下一批分离纯化。如果使用次数较多，或要纯化不同样品时，用2－3倍柱体积非离子去污剂除去吸附在凝胶中的杂质，或卸下凝胶，用浸泡，再水洗。然后加入20%乙醇或0.04