土壤亮氨酸氨基肽酶(S-LAP)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4066.pdf

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土壤亮氨酸氨基肽酶 (S-LAP )活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法 注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。 货号:UPLC-MS-4066 规格:50T/24S 产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。 试剂名称 规格 保存条件 试剂一 液体 50mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×2 瓶 2-8℃保存 溶液的配制: 1、 试剂二:临用前取 1瓶加入 3mL 丙酮溶解,用不完的试剂 2-8℃保存一周。 产品说明: S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶,由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切 相关。 S-LAP分解L-亮氨酸对硝基苯胺生成对硝基苯胺,后者在405nm有最大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计 算S-LAP活性。 S-LAP L-Leucine-p-Nitroanilide P-Nitrophenol 注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、天平、离心机、水浴锅、研钵、甲苯 (不允许快递)、丙酮 (不允许快 递)、30-50目筛、蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理 (可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献) 取 新鲜土样自然风干或 37℃烘干,过 30-50 目筛。 二、测定步骤 1、 分光光度计预热30min以上,波长调至405nm,蒸馏水调零。 2、 加样表: 测定管 对照管 风干土样 (g) 0.1 0.1 甲苯 (μL) 50 50 震荡混匀,室温静置15min。 试剂一 (μL) 850 850 电话:400-998-2324 邮箱:service_uplc_ms@163.com 网址: 本产品仅供科学研究使用!请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途!-上海液质检测技术有限公司 1 2 第 页 共 页 试剂二 (μL) 100 - 置于30℃水浴锅准确反应1h后,立刻煮沸5min (盖紧,缠封口膜,防止崩开水分散失)。流水冷却至室温。 试剂二 (μL) - 100 14000g,常温离心10min,取上清于405nm处测定吸光值,分别记为A测定管、A对照管,计算ΔA A测 定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。 三、酶活计算公式 酶活性定义:每克土壤每分钟生成1nmol对硝基苯胺为一个酶活力单位。 9 S-LAP活性 (U/g 土样) ΔA÷(ε×d) ×10 ×V反总÷W÷T 1.689×ΔA÷W

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