莽草酸脱氢酶（SD）活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4469.pdf

莽草酸脱氢酶 （ ）活性检测试剂盒说明书 微量法 SD 货号:UPLC-MS-4469 规格: 100T/96S 产品组成 ：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致 ，有疑问请及时联系工作人员 。 试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体 100mL×1瓶 4℃保存 试剂一 液体 10mL×1瓶 4℃保存 试剂二 粉剂×1瓶 4℃保存 试剂三 粉剂×1瓶 -20℃保存 溶液的配制： 1、 提取液：内含不溶物，用前摇匀。 2、 试剂二：临用前加入 5mL 蒸馏水溶解。 3、 试剂三：临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水溶解。 4、工作液的配制：根据用量按照试剂一：试剂二：试剂三为 7:4:8 的体积比例充分混匀，备用，用前 25℃预热 15min。 产品说明 ： 莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶(EC 5) 是莽草酸合成代谢 途径中催化第四步反应的关键酶。 莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。 注意 ：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验 。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测 。 需自备的仪器和用品 ： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、 冰和蒸馏水。 操作步骤 ： 一 、样本处理 （可适当调整待测样本量 ，具体比例可以参考文献 ） 1、组织：按照组织质量 （g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例 （建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取 液 （加入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。 4 2、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量 （10 个）：提取液体积 （mL）为500~1000： 1 的比例 （建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞 （功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后 8000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。 3、液体：直接检测。 二 、测定步骤 1、 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 电话：400-998-2324 邮箱：service_uplc_ms@163.com 网址： 本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！-上海液质检测技术有限公司 1 2 第 页 共 页 2、 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂 试剂名称 空白管 测定管 工作液 （µL） 190 190 样本 （µL） 10 蒸馏水 （µL） 10 加入样本即开始计时，充分混匀后于 340nm 处测定 20s 时的吸光值 A1和5min20s 时的吸光值 A2， 计算ΔA 测定管 A2 测定-A1测