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乙醇沉淀DNA和异丙醇沉淀DNA的区别
乙醇沉淀dna和异丙醇沉淀dna的区别
异丙醇和酒精都是有机溶剂,一般来讲,提取质粒的时候一开始都要用异丙醇沉淀,因为异丙醇沉淀的效果要好一些,但最后大多用酒精沉淀,因为酒精容易挥发,对下游的实验影响小
异丙醇比较亲水性,能够很更好地结晶核酸,用乙醇的目的就是回去盐,它比异丙醇更亲水,所以能够换成一些盐离子。有时Lagrasse70%的乙醇洗脸样品也就是为了减少盐的溶解度。
在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇,乙醇的极性要强于异丙醇,所以一般用2倍体积乙醇沉淀,但在多糖、蛋白含量高时,用异丙醇沉淀可部分克服这种污染,尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效。
异丙醇结晶核酸时,高浓度盐存有将并使大量多糖存有在溶液中,从而可以达至回去多糖的促进作用。但高浓度的盐存有可以影响核酸的进一步操作方式,因此必须用乙醇多次冲洗脱盐。
优点:所需容积小且速度快,适用于浓度低,而体积大dna样品的沉淀。0.54~1.0倍体积的异丙醇可选择性沉淀dna和大分子rrna和mrna;但对5srna、trna和多糖产物不产生沉淀,一般不需要在低温条件下长时间放置。
缺点:极易并使盐类(如nacl、蔗糖)与dna共沉淀;在dna结晶中异丙醇难以溶解除去,所以常规须要用70%的乙醇冲洗dna结晶数次。
沉淀dna乙醇是首选的有机溶剂,对盐类沉淀少,dna沉淀中所含的衡量乙醇易蒸发去处,不影响以后的实验。在适当的盐浓度下,2倍样品容积的95%乙醇可有效沉淀dna,对于rna则需要将乙醇量增加至2.5倍.
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