农作物组织培养.ppt

2、外体消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外层叶片 至超净工作台，用75%酒精擦玉米外层叶片，剥一层擦一层至完 用刀去掉1/3玉米籽粒 挑幼胚 接种到准备好的诱导培养基上（暗培养） 第五十七页，共一百零五页。 3、继代 准备继代培养基(N6+水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇20g/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L+2,4-D1mg/ml) 诱导两次后，转入继代培养基每7天继代一次，直至出透明、黄色、坚硬的愈伤组织，可用于转化（一般继代三次） 第五十八页，共一百零五页。 4、转化 侵染培养（22--25℃，暗培养3天） 恢复培养（暗培养3天） 筛选培养 分化培养 生根培养 壮苗 第五十九页，共一百零五页。 5、移栽及管理 移栽前，应对移栽用的基质进行灭菌。 移栽前，可将培养物不开口移到自然 光照下锻炼2-3天，然后再开口练苗1-2天，以适应将来自然湿度的条件。 玉米组培苗移栽时首先应把根部的培养基清洗干净，以免受细菌或真菌污染而影响幼苗生长。 移栽 第六十页，共一百零五页。 玉米茎尖组织培养的全过程 1、准备工作 接种室消毒 准备培养基（MS+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L) 灭菌 第六十一页，共一百零五页。 1、玉米种子消毒 在500ml三角瓶中装入200—300粒玉米种子 用75%酒精清洗8min 0.1%升汞5min 无菌水洗2遍 加入无菌水静置8h 0.1%升汞8min 无菌水洗5遍 装入钣盒 28℃暗培养3天 第六十二页，共一百零五页。 2、接种 取出培养三天后的种子，接种到MS固体培养基中，根向下伸入培养基中，芽向上，芽萌发得不太好的继续放进饭盒中再培养。 接种到MS固体培养基中的芽放回28℃暗培养3-4天。 第六十三页，共一百零五页。 3、玉米茎尖转化 取出MS固体培养基中的芽放在无菌滤纸上 切根 第六十四页，共一百零五页。 镊子夹胚轴，在茎尖处用刀尖切半边。 第六十五页，共一百零五页。 在茎尖生长点划一小口。 第六十六页，共一百零五页。 转化后，接种于MS培养基中，进行暗培养。 第六十七页，共一百零五页。 3、移栽及其管理 培养3—5天后，将其移栽至至花盆中，其 中注意事项与前面的相同。后期的管理也于前者相近。 第六十八页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 第五节 马铃薯的脱毒培养 目的要求: (1)掌握马铃薯脱毒培养的大致过程， 了解马铃薯脱毒苗的鉴定方法; (2)掌握马铃薯的生物学习性： (3)熟悉微型薯的生产过程 第六十九页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 微型薯 第七十页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 第七十一页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。 第七十二页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 但是，当发现从外地引种栽培1~2个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。 第七十三页，共一百零五页。 滨 州 职 业 学 院 危害马铃薯的病毒有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少50%~80%。 第七十四页，共一百零五页。 第二十五页，共一百零五页。 2.培养方法 花药培养 1、取材 镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 2、消毒 70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸钠溶液中浸泡10-20min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，无菌水冲洗3-5次。 3、培养 固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）；后转入分化培养基培养，形成小植株。 第二十六页，共一百零五页。 水稻花药培养由接种至长出愈伤图 第二十七页，共一百零五页。 花粉培养 与花药不同，花粉培养需进行花粉的分离与纯化及特殊的花粉诱导培养。 第二十八页，共一百零五页。 分离和纯化方法 1、自然散落法(漂浮培养散落小孢子收集法) 将花药接种在预处理液或液体培养基上，待花粉自动散落后，收集培养。 2、挤压法 在烧杯或