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质粒转化农杆菌 感受态制备 质粒转化农杆菌感受态制备 质粒转化农杆菌感受态制备 1、农杆菌挑选：lba4404、eha105、gv3101 2、农杆菌活化：将保存的农杆菌在固体lb培养基上画线（或加或不加抗生素，lba4404:rif或str；eha105：rif或str；gv3103：庆大霉素。如果不加抗生素就有可能造成这些菌株的ti质粒丢失，导致农杆菌缺乏侵染性），抗生素浓度为：50μg/ml。28℃培养。 3、农杆菌感受态细胞的制取： 1）挑取单菌落接种于3mllb液体培养基中，220rpm28℃振荡培养至od600=0.5。 2）汲取1.5ml菌液于离心管中，冰浴10min； 3）5000（13000）rpm离心30s，弃去上清液； 4）结晶用1.5ml0.5mnacl漂浮,冰浴20min； 5）5000（13000）rpm离心30s，弃去上清液； 6）每管用100μl20mmcacl2漂浮，用作转变； 制备好的感受态细胞可马上使用，也可按每管200ul分装于无菌离心管中，于4℃保存48小时内使用，长期贮存时必须在液氮中速冻后转一70℃保存。使用时从一70℃取出，置冰上融化后使用。 4、dna轻易转变农杆菌： 1）50μl农杆菌感受态细胞中加入质粒dna0.1～1