第13章 生物合成核酸类药物.pptxVIP

第13章 生物合成核酸类药物;核酸类物质药物一般可分为两大类： 一类具天然结构的核酸类物质， 另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物。 ;前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、CTP、UTP、ATP、??苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。 ;后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。 正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。;核酸类物质生产方法有化学合成法、酶解法和发酵法三种。 化学合成法生产，工艺比较复杂，设备条件要求较高； 酶解法受到酶源及原材料的局限； 发酵法以糖质原料生产核苷酸类物质，符合食用习惯，生产成本低、效益高，特别是目前基因工程育种技术及高产优化控制技术的采用，使发酵法生产成本大大降低，优势更为明显。;主要核酸类发酵产物及其应用 ;13.1 肌苷的发酵法生产;肌苷化学名是次黄嘌呤核苷，是次黄嘌呤和核糖的缩合物，其磷酸酯为肌苷酸。 在次黄嘌呤核苷中，核糖连在N-9位置上，以糖苷键的形式连接在以呋喃形式存在的核糖第一位碳原子上，分子式为C10H12N4O5，相对分子质量为268.23。 肌苷为白色结晶或呈无水粉末状，无嗅，味微苦，熔点约为218℃，易溶于水，pH近中性。 在饱和水溶液中约含肌苷15g/L，在稀盐酸或氢氧化钠溶液中易溶，在氯仿、乙醇中不溶。;肌苷的结构式;2．生产菌种 主要为细菌，如枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、产氨短杆菌、谷氨酸棒杆菌、谷氨酸小球菌、节杆菌、铜绿色假单胞菌、大肠杆菌等。 此外，一些酵母和霉菌也可产生肌苷。;3．培养基 斜面培养基：葡萄糖1.0％、牛肉膏1.4％、蛋白胨1.0％、酵母膏1.0％、氯化钠0.5％，pH7.0~7.2。 种子培养基：葡萄糖1.0％、酵母膏1.5%、蛋白胨1.0％、玉米浆0.5％、氯化钠0.5％，pH7.0~7.2。 发酵培养基：葡萄糖12％、酵母粉1.4％、硫酸铵1.3％、玉米浆0.5％、尿素0.2%、氯化钾0.6%、磷酸氢二钠0.5％、硫酸镁0.22％、碳酸钙2.0％、pH 7.0~7.2。 灭菌条件：斜面培养基0.1 MPa，20min，种子培养基及发酵培养基0.08MPa，15min。;4．生产工艺;5．发酵控制;磷酸盐对肌苷生成有很大影响。 采用短小芽孢杆菌的腺嘌呤缺陷型发酵时，可溶性磷酸盐如磷酸钾显著抑制肌苷累积，不溶性磷酸盐如磷酸钙可促进肌苷的生成。 采用产氨短杆菌变异株时，肌苷发酵不需要维持低水平无机磷，即使添加2％磷酸盐，也能累积大量肌苷。;肌苷生产菌株一般为腺嘌呤缺陷型菌株，培养基中须加入适量腺嘌呤，如酵母膏等。 由于腺嘌呤是肌苷酸的前体，而腺苷酸又是控制IMP生物合成的主要因子，所以加入腺嘌呤的多少，不仅影响菌体的生长，更影响肌苷积累。 腺嘌呤对肌苷积累最适浓度比菌体生长所需要的最适浓度小一些，称为亚适量。; 氨基酸促进肌苷积累、节约腺嘌呤用量。 其中组氨酸是必需的，异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸等8种氨基酸也有促进作用。 除组氨酸外的其他8种氨基酸可以用高浓度的苯丙氨酸一种来代替。 氨基酸可通过促进菌体生长使肌苷产量增加。;发酵条件，如pH值、温度、通气搅拌等都是影响肌苷积累的重要因素。 肌苷积累的最适pH值为6.0~6.2； 最适温度对枯草杆菌为30℃，对短小芽孢杆菌为32℃； 供氧不足可使肌苷生成受到显著的抑制，而积累一些副产物； 通气搅拌可减少CO2对肌苷发酵的抑制作用。;6．肌苷的生理作用和药用价值;当细胞内ATP含量显著或持续下降时，细胞功能低下，此时细胞进入低能状态，ATP的加入可以解除这种低能状态。 但ATP不能透过细胞膜，而肌苷对细胞有高度的渗透性，因此，肌苷是唯一代替人体增加ATP的药物。 肌苷进入细胞后生成丙酮酸，丙酮酸可转化为辅酶A和乳酸。;肌苷主要应用于心脏疾病、肝脏病、白细胞减少症、放射性照射病、贫血病、血吸虫病、视网膜炎、神经萎缩、毛地黄中毒等症。 肌苷可制成肌苷二醛、异丙肌，对精巢上皮瘤、麦粒细胞癌以及某些病毒性疾患都可以起缓解或抵抗作用，还可制造干扰素的诱导剂。 此外，肌苷磷酸化后生成肌苷酸，是制造强力味精的前体物质。;13.2 肌苷酸的生产; 肌苷酸为白色结晶粉末状或颗粒状，味鲜，无臭，易溶于水，在乙醇或其他有机溶剂中溶解度极小。 核苷和碱基容易透过细胞