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过氧化氢酶活力测定 CAT 过氧化氢酶活力测定碘量法 □的意义 过氧化氢酶 (Catalase, CAT)普遍存在于植物所有组织中，其活性与 植物 的代谢强度、抗衰老、抗寒、抗病能力有一定关系，在生产实践中常进行测 定。学习 儿种测定 CAT 活性的方法，理解其测定原理。 —、实验原理 过氧化氢酶能把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，可以一定时间内分解的 过氧 化氢量或生成氧气的量来表示。H0 的测定常采用氧化还原滴定法，碘量法是 其经典方 法。其原 22 理是在有催化剂钳酸钱存在时，过氧化氢与碘化钾反应，放出游离碘，再用硫 代硫 酸钠滴定碘，以淀粉指示剂指示滴定终点。根据空口和测定二者滴定值之 差，即可算 出酶分解的过氧化氢量。其反应为： H0 十 2KI 十 HSO ?1 十 KSO 十 2H0 I+2NaS0?2NaI+NaS0 222346 二、材料、设备与试剂 1(植物材料小麦或其他植物新鲜叶片。 主要设备天平、研钵、 容量瓶、 酸滴定管、移液管 、 、 2( 100ml 50ml (1 5 10ml) > 100ml 三角瓶。 3(试剂 (1)碳酸钙粉末 的硫酸 取 烧杯 只，加入约 蒸镭水，边搅拌边加 入 (2) 1. 8mol/L 1000ml 1 500ml 100ml 浓硫酸，冷却后用量瓶定容到 1000mlo (3)10,的钳酸钱溶液:称取铝酸 10g,溶于蒸镭水中使成 100mlo (4) 1,淀粉溶液:取 lg 可溶性淀粉于小烧杯中加约 20ml 水调匀，慢慢倾入约 80ml 沸 水中，在搅拌下加热至重新沸腾冷却后贮于滴瓶中(可加少量 HgCl 防 腐)。2 (5) 0. 05mol/L 硫代硫酸钠 称取 NaS0?5H0 25g,溶于新沸腾并冷却过的蒸镭水 中， 2232 加入约 ,并稀释至 升，保存于棕色试剂瓶中，放置暗处。一天后 进行标 0.IgNaCO, 1 定。23 标定方法 :精确称取分析纯 KCrO 约 0(15g 于 500ml 三角瓶中，加 30ml 蒸憎水 溶解， 227 加入 2gKI 和 5ml 6mol/L 盐酸，在暗处放置 5min,然后用水稀释至 200ml,用 0. 05mol/L 硫代硫酸钠溶液滴定，当溶液由棕红色变为浅黄色时，加入 lml 淀粉溶 液， 继续滴至溶液山蓝色变为亮绿色(Cr离子的颜色)为止。计算出 NaSO 的浓度 (KCrO的相 对分子质 3+223227 量为 294 (18) o (6) 0. Olmol/L 硫代硫酸钠，用 20ml 移液管吸取标定过的 0. 05mol/L 硫代硫酸 钠 溶液 20ml,加入 100ml 量瓶中，加水定容，摇匀即成，用时现配。 (7) 0. 05mol/Ltt 氧化氢,取 lml 30,的过氧化氢用水稀释至 150ml,用 0. 05mol/L 硫代硫酸钠标定。 三、操作方法 1 (酶液提取 称取混匀的新鲜小麦叶片 1“置研钵中加 0.2g 碳酸钙和蒸憎水 2ml,仔细研 磨成匀 浆，移入 100mL量瓶中，用蒸镭水稀释至刻度，振荡片刻，静置。取上清液 10ml移人 100ml 量瓶加蒸僻水稀释至刻度(稀释 10倍)、摇匀备用。 2 仮应 取 三角瓶 个，编号。向各瓶准确加入稀释后的酶液 立即向 、 100ml 4 10ml, 3 4 号瓶中加入 1 (8mol/L硫酸 5ml 以终止酶的活动，作为空口。然后将各瓶放在20? 水 浴中保温，待瓶内溶液温度达 20?时，向各瓶准确加入 58ml 0. 05mol/L 氧化 氢，摇匀 并记录加入时 间。继续在 浴中作用 后，再依次向 、