基因工程工具酶.pptVIP

基因工程工具酶;基因工程主要内容;一、基因及基因工程概述;1 基因工程的发展历程;1926年摩尔根《基因论》：基因以直线形式排列，它决定着一个特定的性状，而且能发生突变并随着染色体同源节段的互换而交换，它不仅是决定性状的功能单位，而且是一个突变单位和交换单位。 1941年比德尔和塔特姆提出一个基因一个酶学说，证明基因通过它所控制的酶决定着代谢中生化反应步骤，进而决定生物性状。 1949年鲍林与合作者在研究镰刀型细胞贫血症时推论基因决定着多肽链的氨基酸顺序。 1944年艾弗里、麦卡蒂等人发表了关于“转化因子”的重要论文，首次用实验明确证实：DNA是遗传信息的载体。 1953年Watson和 Crick提出了DNA双螺旋结构模型。;1957年Benzer以T4噬菌体作为研究材料分析了基因内部的精细结构，提出了顺反子学说。从而认为基因为DNA分子上一段核苷酸顺序，负责着遗传信息传递。 1961年法国雅各布（F. Jacob）和莫诺（J.L. Monod）在研究大肠杆菌乳糖代谢的调节机制中发现了有些基因不起合成蛋白质模板作用，只起调节或操纵作用，提出了操纵子学说 1967 Nirenberg和 Khorana等破译了全部64个遗传密码。 1970年Temin发现逆转录酶这一成就进一步发展和完善了“中心法则”。;;基因工程三大理论基础 遗传物质是DNA DNA的双螺旋结构 遗传信息传递方式：中心法则 技术上的三大发明 工具酶 载体 逆转录酶;2 基因工程的概念;遗传工程：发生在遗传过程中的自然界原本存在的导致变异的一种现象，即自然出现的不同DNA链断裂并连接成新的DNA分子，新的DNA分子含有不同于亲体的DNA片断 DNA重组：根据遗传工程原理利用限制性内切酶在体外对DNA进行人工操作，即采用酶法将来源不同的DNA进行体外切割与连接，构成杂种DNA分子，在自然界一般不能自发实现。 克隆：同一个祖先通过无性繁殖的方式产生的后代，或具有相同遗传性性状的DNA分子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体。;3 基因工程的主要内容;带有目的基因的DNA片断的分离或人工合成 在体外，将带有目的基因的DNA片断连接到载体上，形成重组DNA分子 重组DNA分子导入受体细胞 带有重组DNA分子的细胞培养，获得大量的细胞??殖群体 重组体的筛选 重组体中的目的基因的功能表达;基因工程工具酶;二、基因工程理论基础;1 DNA的结构与功能;1）DNA的分子组成与基本结构;碱基 ——嘧啶碱 ——嘌呤碱 ;核苷： N－C键，碳环上的C1与嘧啶碱 的N1或与嘌呤碱的N9相连接;（3）核苷酸：戊糖羟基被磷酸化，多是5’-核苷酸。用碱水解RNA，可得到2’-与3’-核糖核苷酸的混合物 ;脱氧核糖核酸（DNA） （1）Chargaff法则 ——A＝T，G＝C， A＋G＝T＋C ——DNA的碱基组成具有种的特异性 （2）DNA的一级结构，形成3’,5’-磷酸二酯键 ;DNA双螺旋模型基本特点 两条反向平行的多核苷酸围绕同一中心轴相互缠绕 嘌呤与碱基位于双螺旋的内侧，磷酸在外测 双螺旋的平均直径为2nm 两条核苷酸依靠彼此之间形成的氢健相联系而结合在一起 碱基在一条链的顺序不受任何限制，但是两条链之间互补。;DNA的复制;DNA复制过程（原核生物） DNA复制叉上进行的基本活动包括 双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延长 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片断 切除和修复渗入DNA的脱氧尿苷酸和错配碱基;真核生物的DNA复制 有许多复制起点 在全部复制完成之前，不再新的复制 首先复制的是常染色质细胞，然后才是异染色质 亲代核小体的组蛋白全保留 ;2 DNA的变形、复性与杂交;3 RNA的转录与逆转录;1）RNA的结构;基因工程工具酶;基因工程工具酶;2）RNA的转录; 在体外，两条链可同时转录，在体内仅有一条链，或某些区域以这条链转录，另一条区域以另一条链转录 以完整双链DNA为模板，DNA链局部解开，转录后双链仍然保持双链的结构， 转录分为起始、延长和中止三个步骤 合成方向5’ 3’方向;;3）RNA的逆转录;逆转录过程：致癌RNA病毒进入细胞——逆转录酶合成双链DNA（前病毒）——环化并进入细胞核——整合进宿主细胞并转录;4 基因的表达与调控;操纵子：细菌基因的表达和调控单位，包括结构基因、调节基因和由调节基因所控制的序列。 启动子：与RNA聚合酶识别，结合和开始转录的一段DNA序列 中止子：提供转录停止信号的DNA序列 内含子：真核基因的编码区域 外显子：真核基因中结构基因中的非编码区域;原核生物中的基因的表达和调控;基因工程工具酶;真核生物中基因的表达和调控 基因转录