普通肉汤琼脂培养基使用.doc

食品检测 　　中文名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基) 　　英译名称：Nutrient Agar 　　品种编号：022020 　　营养琼脂规格：250g干粉培养基 　　营养琼脂用途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定。 　　营养琼脂使用原理： 蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。 微生物图册： 　　营养琼脂配方(每升)： 　　蛋白胨10g 　　牛肉膏粉3g 　　氯化钠 5g 　　琼脂15g 　　最终pH 7.3±0.2 　　营养琼脂使用方法： 　　1、称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 　　2、(食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液。依次做1：100，1：1000……稀释液。 　　3、根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。 　　4、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的 培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h。 　　5、观察结果。 　　6、菌落计数方法： 　　做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。 　　7、菌落计数的报告： 　　选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计。 　　营养琼脂质量控制： 　　本营养琼脂接种下列菌株，置于36±1℃温箱中培养48±2h，结果如下： 　　菌 名　　　　　　　　菌 号　　　 生长状况 　　　　菌落特征 　　大肠埃希氏菌　　ATCC25922　　　　良好　　白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。 　　金黄色葡萄球菌　ATCC6538　　　　 良好 　　黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。 　　贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。