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无菌室标准化规程及验收规范 本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 微生物检测实验室 三．责任者qc主管生测员 五．安全注意事项 严苛无菌操作，避免微生物污染；操作方式人员步入无菌室应先关上紫外灯。 1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 2.无菌室应当保持清洁，不得堆满杂物，以免污染。 3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 4.无菌室应当配有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的崭新洁尔攻灭溶液，等等。 5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.须要带进无菌室采用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应当缝合严格，并应当经过适合的方法杀菌。 7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 8.无菌室采用前必须关上无菌室的紫外灯紫外光杀菌30分钟以上，并且同时关上无尘室台展开Alappuzha。操作方式完，应当及时清扫无菌室，再用紫外灯紫外光杀菌20分钟。 9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 10.每次操作过程中，均应当搞阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 12.注射针每次采用前后，必须通过火焰灼热杀菌，等待加热后，方可注射培育物。 13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 14.如有菌液淋在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的去苏尔沉没在被污染处至少30分钟，再搞处置。工作衣帽等受菌液污染时，应立即退回去，高压蒸汽杀菌后冲洗。 15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 16.无菌室应当每月检查菌落数。在无尘室工作台打开的状态下，挑内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别转化成融化并加热至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放入凝结后，好像放在30～35℃培养箱培育48小时，证明无菌后，挑平板3～5个，分别置放工作边线的左中右等处，开盖曝露30分钟后，好像放在30～35℃培养箱培育48小时，抽出检查。100级洁净区平板杂菌数平均值严禁少于1 个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 七．参考《药品卫生检验方法》《中国药品检验标准操作方式规范》中(无菌检查法)章节中华人民共和国医药行业标准yy/t0188.6-1995《药品检验操作规程》 无菌室技术指导说明 在赢得了无菌环境和无菌材料后，我们还要维持无菌状态，就可以对某种特定的未知微生物展开研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很难混进。外界不相干的微生物混进的现象，在微生物学中我们叫作污染杂菌。避免污染就是微生物学工作中十分关键的技术。一方面就是全盘杀菌，另一方面避免污染，就是无菌技术的两个方面。另外，我们还要避免所研究的微生物，特别就是病原体微生物或经过基因工程改建了的本来自然界不存有的微生物从我们的实验容器中逃离现场至外界环境中回去。为了这些目的，在微生物学中，存有许多措施。 无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。选用彩钢板及钢化玻璃建造。面积不宜过大，约5—20平方米即可，高2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。工作台的台面应该处于水平状态。无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面1米。工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。 当前无菌室多存有于微生物工厂，通常实验室则采用无尘室台。无尘室台其主要功能就是利用空气层流装置确定工作台面上部包含微生物在内的各种微小尘埃。通过电动装置并使空气通过高效率过滤器具后步入工作台面，并使台面始终保持在流动无菌空气掌控之下。而且在吻合外部的一方存有一道高速流动的气帘避免外部induces空气步入。 无菌操作技术当前不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，而且在许多生物技术中也被广泛应用。例如转基因技术、单克隆抗