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培养基配制 分装和灭菌 培养基配制分装和灭菌 培养基配制period;分装和灭菌 1介绍并掌控培养基的酿制、灌装方法； 2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 培养基就是可供微生物生长、产卵、新陈代谢的混合养料。由于微生物具备相同的营养类型，对营养物质的建议也各不相同，加之实验和研究的目的相同，所以培养基的种类很多，采用的原料也各存有差异，但从营养角度分析，培养基中通常所含微生物所所需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应当具备适合的ph值、一定的缓冲器能力、一定的水解还原成电位及最合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经做成就应当及时全盘杀菌，以供氢铵培育用。通常培养基的杀菌使用高压蒸汽杀菌。 1、器皿及材料 天平、秤纸、牛角匙、高精度ph试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、圆柱形、灌装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、杀菌锅、干燥箱。 蛋白胨、牛肉膏、nacl、k2hpo4、琼脂、nano3、kcl、mgso4、feso4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%naoh溶液、5%hcl溶液。 表示药品→熔化→调ph值→融化琼脂→过滤器灌装→缝合标记→杀菌→挂斜面或好像平板。 1培养基的制备 1.1秤药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 用量筒挑一定量(约占到总量的1/2)蒸馏水放入烧杯中，在贴有石棉网的电炉上小火冷却，用玻棒烘烤，以免液体外溢。等待各种药品全然熔化后，暂停冷却，补齐水分。如果配方中存有淀粉，则先将淀粉用少量冷水阳入成糊状，并在火上冷却烘烤，然后二行程水分及其它原料，等待全然熔化后，补齐水分。 1.3调节ph 根据培养基对ph的建议，用5%naoh或5%hc1溶液调到所须要ph。测量ph需用ph试纸或酸度计等。 1.4溶化琼脂 液态或半液态培养基须重新加入一定量琼脂。琼脂重新加入后，复置电炉上一面烘烤一面冷却，直到琼脂全然融化后就可以暂停烘烤，并补齐水分(水需预演)。特别注意掌控火力不要并使培养基外溢或着火。 1.5过滤分装 灌装时特别注意不要并使培养基渗入在管口或瓶口，以免淋湿棉塞，引发污染。液体灌装高度以试管高度的1/4左右为宜。液态分后装装量为管及低的1/5，半液态灌装试管通常以试管高度的1/3为宜；灌装三角瓶，其装量以不能少于三角瓶容积的一半为宜。 1.6包扎标记 培养基灌装后雷涅棉塞或试管帽，再标靶一层防潮纸，用棉绳系则不好。在包装纸上标明培养基名称，制取界别和姓名、日期等。 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 1.8好像平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。 杀菌就是指杀掉或歼灭一定环境中的所有微生物，杀菌的方法分后物理和化学杀菌法两大类。本实验主要了解物理方法的一种，即为冷却杀菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 2.1湿热杀菌 煮沸消毒法：注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2操作方法和注意事项 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加