CIK细胞培养方案.docVIP

CIK细胞培养方案 外周血干细胞提取及诱导CIK细胞的培养方案 1.将所得外周血置入蓝瓶内～取50ml离心管,支～装入ficol分离液各按1:1-1:3, 沿壁加入外周血。 2.平衡离心～1200-1800r/min,30min,4度 3.分别取出血浆置入50ml离心管～于56度灭活30分～4000r/min,10分离心 4.分装离心后血浆～去除底层絮状物～分别存于-20度～4度冰箱 5.取ficol分离后的白膜层细胞～清洗2-3遍(PBS/生理盐水,～1500-2000r/min,离心5分钟。 66.计数。以2x10 /ml 接种于纯培养基加1%血清, gama干扰素～IL-1～24h 后加CD3,IL-2,100ml 培养基加100ul IL-2) 7.培养箱中进行培养 8.每天观察细胞生长情况,一般每两天倍增补液～直至12瓶),补液培养基为完全培养基(1L培养基 1支IL-2,1支庆大霉素, 9.微生物检测～及细胞表型检测 9 10.每次回输细胞数应大于2.0X10回输连续三天。 CIK细胞回输流程及相关注意事项 1.备100ml 生理盐水1瓶～除去10ml盐水～注入10ml人血清白蛋白～及400ul IL-2 (2ml培养基注入粉剂1百万个单位规格) 2.CIK细胞一个疗程3次～每次回输需将4瓶细胞分装入50ml离心管,近20支,～2000r/min,离