《核酸化学生物化学》.ppt

整理课件 一、一般物理性质 1. DNA白色纤维状固体，RNA白色粉末状固 体，都微溶于水，不溶于乙醇，因此常用乙醇来 沉淀DNA ； DNA溶液黏度大于RNA 。 2. DNA难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于 1—2 mol/L的NaCl溶液，RNA则相反，可据此 分离二者。 3. 加热条件下， D－核糖＋浓盐酸＋苔黑酚 绿色 D－2－脱氧核糖＋酸＋二苯胺 蓝紫色 二、核酸的水解 核酸分子中的磷酸二酯键可在酸或碱性条件下水解切断。 DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。室温条件下，DNA在碱中变性，但不水解，RNA水解。 在细胞内核酸分子受DNA酶作用。 三、两性解离 核酸含酸性的磷酸基团，又含弱碱性的碱基，为两性电解质，可发生两性解离； 核酸相当于多元酸，pH大于4时，呈阴离子状态； 等电点 四、紫外吸收 在核酸分子中嘌呤碱和嘧啶碱都含有共轭双键体系，在260 nm有吸收； 可以作为区别蛋白质和对核酸及其组份定性和定量测定的依据，进行核酸纯度鉴定，也可作为核酸变性和复性的指标。 DNA的紫外吸收光谱 天然DNA 变性DNA 核苷酸总吸收值 1 2 3 220 240 260 280 0.1 0.2 0.3 0.4 波长（nm） 光吸收 1 2 3 根据A260/A280的比值判断核酸样品的纯度 纯DNA：A260/A280=1.8 纯RNA：A260/A280=2.0 （若样品中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280比值明显降低） 纯的核酸样品可根据260nm的光吸收值算出其含量 若260nm光吸收值为1相当于50μg/ml双螺旋DNA 或相当于40μg/ml单链DNA或RNA 或相当于20μg/ml寡核苷酸。 五、DNA的稳定性 1.DNA的溶液呈粘稠状，但实际上DNA 的双螺旋结构僵直而有刚性，易断成 碎片，这也是目前难以获得完整大分 子DNA的原因。 2.溶液状态的DNA易受DNA酶作用而降 解，抽干水分的DNA性质十分稳定。 六、DNA的变性 1. 概念 2. 变性条件 3. 变性的特征 DNA的一级结构也可指DNA分子中碱基的顺序。 DNA的碱基顺序本身就是遗传信息存储的分子形 式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种 核苷酸千变万化的不同排列组合之中。 （二）DNA的二级结构 Watson 和 Crick 于1953年提出了DNA 双螺旋结构模型，说明了DNA 的二级结构。（即B型DNA） （1）Chargaff定则 （1950s,E. Chargaff发现） DNA碱基组成符合： A=T；G=C； A+G=T+C。 不对称比率：A+T/G+C； 物种不同，DNA碱基组成不同； 物种亲缘愈接近，碱基组成也愈接近，该比 率越相近似。 Ⅲ.具有种的特异性，没有器官和组织的特异性，年龄、营养状况、环境的改变不影响DNA的碱基组成。 1．提出DNA双螺旋结构模型的根据 （2）x-光衍射分析 20世纪40年代Astbury 1952年M.Wilkins 2．DNA双螺旋结构模型（double-helical structure） 1953年Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构。 DNA双螺旋结构模型要点（1） 螺旋中的两条链反向平行，即其中一条链的方向为5′→3′，而另一条链的方向为3′→5′，两条链共同围绕一个假想的中心轴呈右手双螺旋结构。 DNA双螺旋结构模型要点（2） 疏水的碱基位于双螺旋的内侧，亲水的磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基平面与螺旋轴垂直，脱氧核糖平面与中心轴平行。 由于几何形状的限制，碱基对只能由嘌呤和嘧啶配对，即A与T，G与C。这种配对关系，称为碱基互补。A和T之间形成两个氢键， G与C之间形成三个氢键。 T-A碱基对 C-G碱基对 DNA双螺旋结构模型要点（3） 由于碱基对排列的方向性，使得碱基对占据的空间是不对称的，因此，在双螺旋的表面形成大小两个凹槽，分别称为大沟和小沟，二者交替出现。 2.0 nm 小沟 大沟 DNA双螺旋结构模型要点（4） 双螺旋横截面的直径约为2 nm，相邻两个碱基平面之间的距离（轴距）为0.34 nm，每10个核苷酸形成一个螺旋，其螺距（即螺旋旋转一圈）的高度）为3.4 nm。 2.0 nm 小沟 大沟 DNA双螺旋结构模型要点（5） 两条链借碱基之间的氢键和碱基堆积力（即碱基之间的范德华力）牢固的连接起来，维持DNA双螺旋的三维结构。 两条链是碱基互补关系。 3. DNA的双螺旋结构稳定因素 ? 氢键 ?碱基堆积力 ?磷酸基上负电荷被胞内组蛋白或正离子中和 ?碱基处于疏水环境