诺唯赞试剂说明书 蛋白提取 RIPA裂解液.pdfVIP

RIPA裂解液 E311-01/02 Vazyme biotech co., ltd. 产品简介 RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA裂解液制备用于免疫共 沉淀的裂解产物已经是一种首选的标准操作。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western 、IP等。 产品组成 组 分 E311-01 50 rxn E311-02 100 rxn RIPA 50 ml 100 ml 储存条件 4℃保存。若发现有少许絮状沉淀，属正常现象，只需在37℃加热溶解即可使用。 使用方法 A. 细胞裂解 1.裂解液制备：每1 ml冷的RIPA裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物 ( 自备)，混匀后置冰上备用。 2. 取5-10 × 106个细胞，在4℃，1,000 rpm条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。 3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 6 6 2 4. 每5 × 10 个细胞中加入500 μl冷的裂解液 (每10 个细胞加100 μl RIPA裂解液，相当于6孔板的每孔加入100 μl~150 μl，或一个75 cm 培 养瓶加1~2 ml。裂解液和细胞应充分接触。如果RIPA裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低)，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。 5. 在4℃，14,000 rpm条件下离心15分钟。 6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。 B. 组织裂解 1.裂解液制备：每 1 ml冷的RIPA裂解液加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 2. 取100 mg组织样本剪碎，加入1 ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。 3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃，10000 rpm条件下离心5分钟。 4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。 上述蛋白提取物可立即用于后续实验，或分装后于-80℃冰箱保存备用。 注意事项 1.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。 2. 整个过程须保持样品处于低温状态。 3. 蛋白浓度用BCA法测定 (E112) 。 诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@ Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@