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DB6111/T 171—2021 草莓脱毒苗育苗技术规程 1 范围 本文件规定了草莓脱毒苗育苗技术的术语与定义、脱毒原原种苗、脱毒原种苗和脱毒商品苗的生产 技术。 本文件适用于杨凌示范区草莓脱毒苗的培育管理。生态环境、物候条件相似地区可参考执行。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 406-2000 脱毒草莓种苗病毒检测技术规程 3 术语和定义 下列术语与定义适用于本文件。 3.1 茎尖培养脱毒 method for virus elimination by shoot tip culture 用植株茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。 3.2 超低温脱毒 method for virus elimination by cryotherapy 植株茎尖经过预培养、冷冻保护剂 （PVS2）处理、液氮冷冻、复苏后组织培养，获得脱毒植株的过 程。 3.3 热处理脱毒 thermotherapy-based method for virus eradication 组培苗在35 ℃～40 ℃条件下，光照继代培养1个月～2个月，取茎尖经组织培养获得脱毒植株的过 程。 3.4 脱毒原原种苗 breeder’s virus eradication stock 经脱毒处理的原始植株。 3.5 1 DB6111/T 171—2021 脱毒原种苗 originalvirus eradication stock 用脱毒原原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。 3.6 脱毒商品苗 virus eradication culture stock 用脱毒原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。 4 脱毒原原种苗生产 4.1 外植体建立 在封闭无害虫的设施内选择表现品种特性的健壮待脱毒植株，采集2cm匍匐茎顶端，置于组培瓶中， 加入适量中性洗涤剂在流动的自来水下冲洗1 h～2 h。用75%乙醇表面消毒30 s，再用2%次氯酸钠溶液 消毒10min，无菌水冲洗5遍。用滤纸吸干水分，将茎尖置于MS＋0.1mg/LNAA＋0.5mg/L 6-BA＋8 g/L 琼脂＋30 g/L蔗糖(pH 5.8)培养基中无菌培养1个月左右。培养条件为温度23 ℃，光照时间16h/d，光 照强度2400 Lx。 4.2 病毒检测 培养得到的外植体，按NY/T 406-2000的规定检测病毒。 4.3 检测后处理 4.3.1 无毒外植体 直接作为脱毒苗原原种使用。 4.3.2 带毒外植体 4.3.2.1 茎尖培养 经检测只携带草莓轻型黄边病毒的外植体，在超净工作台中用无菌刀片切取0.2mm～0.5mm生长点 茎尖，接种到MS＋0.05 mg/L NAA＋0.3 mg/L 6-BA＋8 g/L琼脂＋30 g/L蔗糖培养基中，在23 ℃，光照 时间16 h/d，光照强度2400 Lx条件下培养50 d～60 d。 注：超净工作台使用前打开紫外消毒灯消毒30 min，关闭紫外灯，打开风机用中等风量通风1 h后方可使用。无菌 刀片使用前，用75%酒精消毒，再在酒精灯上烧1min以上，冷却后方可使用。操作人员需佩戴口罩，穿好实验 服，操作前手及手臂需经过75%酒精喷雾消毒。 4.3.2.2 超低温脱毒 经检测携带草莓斑驳病毒 （strawberry mottle virus, SMoV）或同时携带草莓斑驳病毒与草莓轻 型黄边病毒 （strawberry mild yellow edge virus, SMYEV）的组培苗，在超净工作台中用无菌刀片切 取1.0 mm～2.0 mm草莓生长点茎尖，接种到MS＋2 mol/L甘油＋0.3 mol/L蔗糖的预培养基上，在4 ℃黑 暗条件下培养3 d。切取1.0 mm～2.0 mm茎尖，在室温下用60%PVS2 （含0.6 mol/L蔗糖的MS与100% PVS2 体积比2:3