高通量测序及个体化医学.pptxVIP

高通量测序及个体化医学会计学测序第1页/共10页 测序是指通过专业的分析工具测定物种细胞内DNA或RNA碱基排序的过程。根据方法的不同，目前测序主要分为Sanger法测序和高通量测序。 Sanger法测序又称为一代测序，该方法利用一种特定的DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物，通过掺入一种链终止核苷酸来完成测序。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入有限量的不同碱基类型的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，从而使延长的寡聚核苷酸选择性地终止延伸，终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。第2页/共10页 高通量测序 高通量测序技术（High-throughputSequencing）是对传统Sanger测序（称为一代测序技术）革命性的改变，由于该种方法能够一次同时对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代或二代测序技术(NextGenerationSequencing，NGS)，足见其划时代的改变。同时，高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(DeepSequencing)单细胞全基因组测序第3页/共10页2014年1月《自然—方法学》（Nature Methods）上发表年度特别报道，将“单细胞测序”（Singled out for sequencing）的应用列为2013年度最重要的方法学进展。单细胞全基因组测序技术是在单细胞水平对全基因组进行扩增与测序的一项新技术。其原理是将分离的单个细胞的微量全基因组DNA进行扩增，获得高覆盖率的完整的基因组之后通过外显子捕获进而高通量测序用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。它解决了用组织样本测序时或样本少无法解决的细胞异质性难题。为从单核苷酸水平深入研究癌症发生、发展机制及其诊断、治疗提供了新的研究思路并开辟了新的研究方向。第4页/共10页全基因组扩增技术主要分为两种类型：一是基于热循环以PCR为基础的扩增技术，如简并寡核苷酸引物PCR (DOP-PCR)、连接反应介导的PCR (LM-PCR)、扩增前引物延伸反应 (PEP)等；二是基于等温反应不以PCR为基础的扩增技术，如多重置换扩增 (MDA) 和基于引物酶的全基因组扩增 (pWGA)。MDA（不以PCR为基础的扩增技术）是目前公认的最好的单细胞基因组扩增技术，它能对全基因组进行高保真的均匀扩增，扩增出10~100kb大小的片段，能提供大量均一完整的全基因组序列。但是MDA也有一些缺点，特别是显著的非特异扩增，往往空白对照样品也总是“无中生有”地产生大量的DNA，另外就是仍然存在序列偏差。另外，对测序得到 的大量数据结果的专业分析也是一个重大的挑战。单细胞全基因组测序正在从基础研究走向临床应用。个体化医疗第5页/共10页传统的循证医学是结合临床医生的个人实践经验和客观的科学研究证据，对于症状相同的病人使用相同剂量的同种药物进行治疗，但治疗效果却千差万别。传统治疗方案显示，肿瘤的无效率高达75%，糖尿病无效率43%，抑郁症无效率也有38%。人们逐渐意识到大多数疾病的发生是自身遗传密码和外界环境共同作用的结果。 精准医疗借助可监测的遗传信息和环境信息，针对个体提供定制的优化治疗方案，提升现有治疗水平，并尽量在发病前就有望有效预防。第一步 基因检测第6页/共10页 从人类发现DNA的双螺旋结构，第一次窥探了生命体如何继承和储存生物信息，到“人类基因组计划”宣布完成，再到高通量测序技术的出现，正逐渐开启“个人基因组”的时代。个人基因组学是实现“精准医疗”的一把利器，而“精准医疗计划”首先就是要完成一百万人的基因组测序。癌症是基因组疾病，每个肿瘤都有自己独特的基因图谱。精准医疗就是通过检测癌症患者的基因信息，利用DNA测序技术确认导致患者患病的基因或者受检者是否携带有肿瘤易感基因，来诊断或治疗患者的疾病。针对每位患者的基因图谱，了解癌细胞内的遗传改变，从而选择更有效的治疗癌症的方式。高通量测序具有较高的精度以及可准确诊断病患基因个体化差异，基因检测技术则在精度上更为准确，可测通量更多，使得基因测序不仅是一种优秀的分子诊断方法，而且是目前最适宜的个体化诊断方式。第二步 建立基因数据库第7页/共10页首先，建立一个整合肿瘤遗传信息与肿瘤疗效数据的信息平台，建立一个对科学家和临床医生同样适用的分子信息和临床知识整合系统。这一知识